线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
MDH (EC 1.1.1.37 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH 分为NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH ,细菌中通常只含有 NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
测定原理:
MDHm 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸,导致 340nm 处光吸收下降。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。测定步骤:操作表
试剂名称(μL)
测定孔
样本
20
试剂四
760
试剂五
10
试剂六
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,混匀后立即在 340 nm波长下记录初始吸光度 A1 和反应 1min后的吸光度 A2 ,计算 ΔA=A1-A2。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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