线粒体柠檬酸(MCA)含量测定试剂盒/分光光度法25管/24样
测定意义:
CA 是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰 CoA 情况,(3)乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理:
CA 在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下, α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙; α-酮酸苯腙在330nm 处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出 CA 的含量。
自备仪器和用品:
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。测定步骤:样本测定:
试剂名称(μL)
空白管
标准管
测定管
试剂一
300
蒸馏水
标准液
样本
试剂二
100
试剂三
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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