丙酮酸脱羧酶(PDC)测定试剂盒/微量法/96S

丙酮酸脱羧酶(PDC)测定试剂盒/微量法/96S

测定意义：

PDC 主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理：

PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH 在 340 nm有吸收峰， 而 NAD+没有；通过测定 340 nm光吸收下降速率， 来计算 PDC 活性。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

PDC 测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于 25℃水浴中预热 30min。

3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 蒸馏水、20μL 混合试剂、140μL 试剂二和 20μL 试剂六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2。

4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 上清液、20μL 混合试剂、140μL 试剂二和 20μL 试剂六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A3 和 A4。

注 意：

空白管只需测定一次。