苹果黑星病菌染料法荧光定量 PCR 试剂盒
商品属性
产品名称 | 苹果黑星病菌染料法荧光定量 PCR 试剂盒 | 英文名称 | Venturia inaequalis Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2649 |
产品概述
本试剂盒专用于检测苹果黑星病菌(Venturia inaequalis)的DNA,采用染料法荧光定量PCR技术,具有高灵敏度和特异性。适用于科研领域,可进行定性和定量分析,线性范围覆盖5个数量级。
产品组成
PCR反应液:包含优化的引物、荧光染料及缓冲体系。
阳性对照:无传染性的DNA片段(标准曲线模板)。
阴性对照:无核酸水,用于排除污染。
酶混合物:含热启动DNA聚合酶,确保扩增特异性。
储存与运输
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
有效期:12个月(详见包装标签)。
使用方法
1. 样品准备
提取待测样品DNA,建议浓度≥10 ng/μL,纯度(A260/A280)为1.8-2.0。
2. 标准曲线制备(定量检测适用)
标记6支离心管(7至2号),每管加入45 μL模板稀释液。
在7号管中加入5 μL阳性对照(1×10^8拷贝/μL),震荡混匀,得到1×10^7拷贝/μL的标准品。依次10倍稀释至1×10^2拷贝/μL。
3. PCR反应体系配制
每20 μL反应体系包含:
10 μL 2×PCR预混液(含染料)
0.5 μL正向/反向引物(终浓度0.2 μM)
2 μL模板DNA(样品或标准品)
补无核酸水至20 μL。
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
| 荧光采集 | 60℃ | 30 sec | |
注:退火温度可根据引物特性调整(建议55-65℃)。
结果分析
定性检测:Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。
定量检测:根据标准曲线计算拷贝数。
注意事项
操作需在无菌环境下进行,避免交叉污染。
阳性对照与样品应分区域处理,使用带滤芯枪头。
试剂解冻后需彻底混匀,短暂离心后使用。
本产品仅限科研用途,不可用于临床诊断。
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