苹果黑星病菌染料法荧光定量 PCR 试剂盒

苹果黑星病菌染料法荧光定量 PCR 试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒专用于检测苹果黑星病菌（Venturia inaequalis）的DNA，采用染料法荧光定量PCR技术，具有高灵敏度和特异性。适用于科研领域，可进行定性和定量分析，线性范围覆盖5个数量级。

产品组成

PCR反应液：包含优化的引物、荧光染料及缓冲体系。

阳性对照：无传染性的DNA片段（标准曲线模板）。

阴性对照：无核酸水，用于排除污染。

酶混合物：含热启动DNA聚合酶，确保扩增特异性。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月（详见包装标签）。

使用方法

1. 样品准备

提取待测样品DNA，建议浓度≥10 ng/μL，纯度（A260/A280）为1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（定量检测适用）

标记6支离心管（7至2号），每管加入45 μL模板稀释液。

在7号管中加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得到1×10^7拷贝/μL的标准品。依次10倍稀释至1×10^2拷贝/μL。

3. PCR反应体系配制

每20 μL反应体系包含：

10 μL 2×PCR预混液（含染料）

0.5 μL正向/反向引物（终浓度0.2 μM）

2 μL模板DNA（样品或标准品）

补无核酸水至20 μL。

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

| 荧光采集 | 60℃ | 30 sec | |

注：退火温度可根据引物特性调整（建议55-65℃）。

结果分析

定性检测：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

定量检测：根据标准曲线计算拷贝数。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免交叉污染。

阳性对照与样品应分区域处理，使用带滤芯枪头。

试剂解冻后需彻底混匀，短暂离心后使用。

本产品仅限科研用途，不可用于临床诊断。

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