苹果锈果类病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 苹果锈果类病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Apple Scar Skin Viroid (ASSVd) Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2667 |
产品特点
即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，操作简便。
高灵敏度：引物及探针经优化设计，可检测低拷贝数目标序列。
高特异性：针对苹果锈果类病毒高度保守区设计引物，避免与其他病毒RNA交叉反应。
内置对照：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于区分假阴性结果。
兼容性：适用于染料法荧光定量RT-PCR，线性范围覆盖5个数量级。
试剂盒组成
5×双酶一管式RT-PCR Buffer：200μL/管
MMLV-Taq Mix：75μL/管
超纯水：1mL/管
苹果锈果类病毒引物混合液：100μL/管
阳性对照（非活体DNA片段）：50μL（1×10^8拷贝/μL）
核酸释放剂：1mL（20次用量）
使用手册：1份
实验操作流程
样品制备
建议设置N+2个提取反应（N为待测样品数，另加阳性对照PC和阴性对照NC）。
阴性对照：超纯水；阳性对照：试剂盒提供DNA片段稀释至与样品体积一致。
使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样品。
RT-PCR反应
反应体系：20μL（含模板RNA、引物、缓冲液、酶混合液等）。
反应程序：按说明书建议设置逆转录（50℃ 30min）、预变性（95℃ 10min）、扩增循环（95℃ 15s → 60℃ 60s，40循环）。
结果分析
定性检测：取5-10μL产物进行1.5%-2.0%琼脂糖凝胶电泳，观察特异性条带。
定量检测：通过荧光定量PCR仪分析Ct值，标准曲线法计算病毒拷贝数。
注意事项
避免反复冻融试剂，分装后使用。
实验废弃物需按生物安全规范处理，防止污染。
阳性对照为DNA片段，不可用于活病毒实验。
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