鼠呼肠孤病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 鼠呼肠孤病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Murine Reovirus Type 3 Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2652 |
产品概述
本试剂盒用于鼠呼肠孤病毒3型（Mouse Reovirus Type 3, RV3）的定性及定量检测，采用探针法荧光定量RT-PCR技术，具有高灵敏度和特异性。适用于科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
RT-PCR反应液：包含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs及优化引物探针。
阳性对照：无传染性的DNA片段（1×10^7拷贝/μL）。
阴性对照：无核酸酶水。
荧光PCR专用模板稀释液。
其他辅助试剂（如适用）。
实验前准备
样本要求：需提供提取的病毒RNA模板，建议使用柱式病毒RNA提取试剂盒或兼容的核酸纯化方法。
设备校准：确保荧光定量PCR仪已校准，反应孔清洁无污染。
分区操作：核酸提取、试剂配制及扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
标准曲线制备（定量检测）
稀释阳性对照：按6个10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），每步更换枪头并充分震荡。
标记离心管：依次编号6至1，加入45 μL稀释液后，逐级加入5 μL上一步稀释液。
保存条件：稀释后标准品置于冰上备用，避免反复冻融。
RT-PCR反应体系
反应体积：20 μL/孔，含模板RNA 2–5 μL。
程序设置：
逆转录：50°C 15分钟
预变性：95°C 3分钟
扩增循环：95°C 15秒 → 60°C 30秒（40循环，荧光采集）
质量控制
阴阳性对照：每批次实验需同步检测，阳性对照Ct值≤35且阴性对照无扩增。
重复性验证：建议临界值样品重复3次，CV≤5%。
结果判读
定量分析：通过标准曲线计算拷贝数。
定性分析：Ct值≤38判定为阳性，＞38或无扩增为阴性。
注意事项
避免试剂反复冻融，开封后尽快使用。
操作时佩戴防护用具，废弃物料需按生物安全规范处理。
若检测环境湿度高，建议使用带芯枪头以减少气溶胶污染。
有效期与储存
有效期：-20°C避光保存12个月，避免反复冻融。
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