青枯雷尔氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 青枯雷尔氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Ralstonia solanacearum Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2671 |
产品特点
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应或几百拷贝/反应（钦诚生物）。
高特异性：引物针对青枯雷尔氏菌保守序列设计，无交叉反应。
即开即用：预混优化引物和反应体系，用户仅需提供DNA模板。
双重用途：支持定性和定量检测，定量线性范围≥5个数量级。
质控保障：含阳性对照（非活体DNA片段），避免假阴性。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI系列（如7500、StepOnePlus）
安捷伦（MX3000P/3005P）
Roche LightCycler
Bio-Rad（CFX系列）
Eppendorf Mastercycler
自备试剂
样本DNA（推荐纯度A260/A280=1.8-2.0）。
10×ROX校正染料（部分机型需添加，参照仪器说明书）。
操作步骤
1. DNA提取
使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA。
2. 标准曲线制备（定量检测需选做）
按10倍梯度稀释阳性对照（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
标记离心管（7~2号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀。
3. PCR反应体系配制
每20μL反应体系建议：
2×qPCR预混液 10μL
引物混合物 0.4μL
DNA模板 2μL
补足无核酸酶水至20μL。
4. 上机程序
预变性：95℃ 3分钟
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
结果分析
定性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。
定量：根据标准曲线计算拷贝数。
注意事项
分区操作：样本制备、PCR配制、扩增需分区域进行。
避免污染：使用带滤芯枪头，阳性对照与样本分装隔离。
仅限科研：不可用于临床诊断。
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