青枯雷尔氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 青枯雷尔氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Ralstonia solanacearum Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2671 |
产品特点
高灵敏度:检测限低至100拷贝/反应或几百拷贝/反应(钦诚生物)。
高特异性:引物针对青枯雷尔氏菌保守序列设计,无交叉反应。
即开即用:预混优化引物和反应体系,用户仅需提供DNA模板。
双重用途:支持定性和定量检测,定量线性范围≥5个数量级。
质控保障:含阳性对照(非活体DNA片段),避免假阴性。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪,包括:
ABI系列(如7500、StepOnePlus)
安捷伦(MX3000P/3005P)
Roche LightCycler
Bio-Rad(CFX系列)
Eppendorf Mastercycler
自备试剂
样本DNA(推荐纯度A260/A280=1.8-2.0)。
10×ROX校正染料(部分机型需添加,参照仪器说明书)。
操作步骤
1. DNA提取
使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA。
2. 标准曲线制备(定量检测需选做)
按10倍梯度稀释阳性对照(10^2~10^7拷贝/μL),独立操作避免污染。
标记离心管(7~2号),依次加入稀释液和模板,涡旋混匀。
3. PCR反应体系配制
每20μL反应体系建议:
2×qPCR预混液 10μL
引物混合物 0.4μL
DNA模板 2μL
补足无核酸酶水至20μL。
4. 上机程序
预变性:95℃ 3分钟
循环阶段(40 cycles):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号)
结果分析
定性:Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。
定量:根据标准曲线计算拷贝数。
注意事项
分区操作:样本制备、PCR配制、扩增需分区域进行。
避免污染:使用带滤芯枪头,阳性对照与样本分装隔离。
仅限科研:不可用于临床诊断。
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