立枯丝核菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 立枯丝核菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Rhizoctonia solani Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2684 |
产品概述
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）的快速、高灵敏度检测。适用于科研领域的定性及定量分析，具有操作简便、特异性强、线性范围广等特点。
实验流程
DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。
标准曲线制备（样本制备区）
标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。
梯度稀释阳性对照：
7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；
依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。
所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。
试剂配制（试剂准备区）
反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。
每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。
加样（样本处理区）
分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。
盖紧管盖，避免气泡干扰。
PCR扩增（核酸扩增区）
按以下程序运行定量PCR仪：
预变性：95℃ 2分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析（可选）。
数据分析
定量检测：以标准品浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本拷贝数。
定性检测：Ct值≤35且熔解峰单一判为阳性。
注意事项
严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。
使用一次性耗材及专用工作服，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。
反应液需避光保存，避免反复冻融。
若用于定量，建议每个样本设3次技术重复。
产品规格
规格：50次/盒（20 μL体系）。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
声明
本试剂盒仅限科研使用，不适用于临床诊断。
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