产品概述

本试剂盒基于双色荧光定量PCR技术(FAM/HEX通道),专为人细胞基因组DNA及血清/血浆游离线粒体DNA(mtDNA)拷贝数绝对定量设计。通过同步检测线粒体基因与核基因内参,实现高灵敏度、高重复性的mtDNA拷贝数分析,适用于衰老研究、肿瘤液体活检及代谢性疾病等领域。
产品名称 | 人线粒体DNA 染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Human Mitochondrial DNA Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3134 |

技术特点

双色荧光同步检测
采用FAM标记mtDNA靶标基因,HEX标记核基因内参(如β-actin),单孔完成双基因扩增,减少样本消耗与操作误差。
绝对定量标准品
配套已知拷贝数的标准品A与校正品B,通过双标准曲线校正批次差异,确保结果准确性。
广泛样本兼容性
适配细胞gDNA(≥10 ng/μL)、血清/血浆游离DNA(建议≥50 μL样本量)。
严格质控标准
GMP级生产,每批次均通过扩增效率(95–105%)、重复性(CV < 3%)及线性范围(10<sup>1</sup>–10<sup>6</sup>拷贝)验证。
操作流程

1. 样本制备
细胞gDNA:使用常规DNA提取试剂盒提取,浓度调整至10 ng/μL。
血清/血浆游离DNA:EDTA抗凝全血需在30分钟内离心分离,提取后立即检测或-80℃保存。
2. PCR反应体系
| 组分 | 体积(μL) |
| 预混液 | 18 |
| 模板DNA | 2(10 ng) |
| 总体系 | 20 |
建议设置技术重复(≥3孔)及阴性对照(NTC)。
3. 扩增程序
预变性:95℃ 2分钟
循环(40轮):95℃ 15秒 → 56℃ 1分钟(荧光采集) → 72℃ 30秒
终延伸:72℃ 5分钟
数据分析
标准曲线生成:
使用标准品A(梯度稀释)生成mtDNA与内参基因的标准曲线。
批次校正:
通过校正品B计算K2系数,修正仪器与试剂差异。
拷贝数计算:
将样本Ct值代入标准曲线方程,输出每微克DNA或每毫升血清中的mtDNA绝对拷贝数。
性能参数

灵敏度:最低检测限10拷贝/反应
特异性:无非特异性扩增(熔解曲线单峰)
适用仪器:ABI 7500、QuantStudio系列、Roche LightCycler等主流qPCR仪
注意事项

避免反复冻融试剂,解冻后需冰上保存并在24小时内使用。
实验全程使用RNase-free耗材,防止核酸污染。
若样本Ct值超出线性范围,建议稀释后重新检测。
存储条件:-20℃避光保存,有效期12个月。
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关键字: 人线粒体DNA ;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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