产品概述
本试剂盒用于牛赤羽病毒（Bovine Akabane Virus）RNA的荧光定量RT-PCR检测，具有高灵敏度、特异性及稳定性。采用荧光探针法，可实现病毒核酸的绝对定量分析，适用于临床样本、动物组织及环境样本的快速筛查。
产品名称 | 牛赤羽病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Akabane Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3350 |
检测原理
RT-PCR技术：通过逆转录酶将病毒RNA逆转录为cDNA，再经Taq DNA聚合酶扩增目标片段。
荧光信号检测：反应体系中包含特异性引物、探针及荧光染料，扩增过程中荧光信号与产物量成正比，通过标准曲线计算病毒拷贝数。
试剂盒组成
核心组分：
RT-PCR预混液（含逆转录酶、Taq酶、dNTPs、Mg²⁺）
牛赤羽病毒特异性引物及探针
阳性对照（灭活病毒RNA）
阴性对照（DEPC水）
标准品梯度（10¹~10⁶ copies/μL）
辅助试剂：
核酸提取液（溶液A、B）
稀释液（C）
溶解液（tD）
操作步骤
1. 样本前处理
固体样本：取1-5 mg组织，加入100 μL溶液A工作液，95℃裂解10分钟，冷却后加入10 μL溶液B混匀，离心取上清。
液体样本：直接取5 μL加入裂解液，同法处理。
2. PCR反应体系配制（40 μL体系）
| 成分 | 体积（μL） |
| RT-PCR预混液 | 20 |
| 引物探针混合液 | 2 |
| 模板DNA（上清液） | 5 |
| DEPC水 | 补足至40 |
3. 扩增程序
逆转录：50℃ 15分钟
预变性：95℃ 3分钟
扩增循环（45次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）
结果判读
标准曲线：以标准品Ct值为纵坐标、拷贝数对数为横坐标绘制曲线，计算样本病毒载量。
阈值设定：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。
注意事项
实验环境：严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。
质量控制：每批次实验需包含阳性对照（Ct值应在预期范围内）及阴性对照（无扩增）。
仪器要求：需使用荧光定量PCR仪，支持FAM通道检测。
储存与有效期
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：12个月。
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关键字： 牛赤羽病毒;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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