产肠毒素性大肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产肠毒素性大肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于检测产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）的特异性基因序列（如热不稳定肠毒素LT或热稳定肠毒素ST基因）。具有以下特点：

高特异性：针对ETEC保守序列设计引物，避免与其他肠道病原体交叉反应。

高灵敏度：检测下限可达100拷贝/反应。

便捷性：预混反应体系（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等），用户仅需提供模板DNA。

防污染设计：一管式闭盖操作，减少气溶胶污染风险。

组成成分

| 成分编号 | 组分名称 | 规格 | 备注 |

| A | 2×qPCR MagicMix（含SYBR Green） | 500 μL | 避光保存（棕色管） |

| B | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 用于标准品梯度稀释 |

| C | ETEC特异性引物混合物 | 100 μL | 冻干粉，使用前离心溶解 |

| D | ETEC阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | 非活菌DNA片段 |

| E | DNA提取试剂（裂解液） | 9 mL | 可选配套使用 |

| F | 说明书及分析证书 | 1份 | - |

操作步骤

1. 样本前处理

粪便样本：取0.1 g置于无菌管，加入1 mL PBS匀浆，离心取上清。

食品样本：参照GB 4789.6-2016预处理，富集后提取DNA。

DNA提取：推荐使用配套裂解液（组分E）或商业化提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释

按10倍梯度稀释阳性对照（10^2~10^7拷贝/μL），每个梯度单独使用带滤芯枪头操作。

3. PCR反应体系配制

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×qPCR MagicMix | 10 |

| ETEC引物混合物 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| ddH₂O | 6 |

| 总体积 | 20 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

| 熔解曲线 | 60~95℃ | 连续采集信号 | - |

结果判读

阈值设定：取扩增曲线指数期阈值线（Ct值≤35为阳性）。

特异性验证：熔解曲线单峰提示特异性扩增。

注意事项

本试剂盒仅限科研使用，不可用于临床诊断。

避免反复冻融试剂，解冻后需充分混匀并离心。

实验分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区分离），防止污染。

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