小鼠穿孔蛋白1(PRF1)ELISA试剂盒
产品原理
试剂盒采用双抗体夹心法，基于酶联免疫吸附检测技术。预先包被的抗小鼠PRF1抗体与样本中的PRF1结合，再加入生物素标记的检测抗体，形成“固相抗体-PRF1-酶标抗体”复合物。加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素结合。加入显色底物TMB，颜色深浅与PRF1浓度成正比，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），绘制标准曲线计算样本浓度。
英文名称 | Mouse PRF1 ELISA Kit | 产品类别 | Mouse/小鼠Elisa试剂盒 |
货号 | A115447 | 规格 | 48T/96T |
灵敏度 | 0.15625ng/mL | 检测范围 | 0.3125ng/mL-10ng/mL |
主要参数
灵敏度：通常为0.1ng/mL。
检测范围：0.16-10ng/mL。
特异性：可特异性检测小鼠PRF1，与其他类似物无明显交叉反应。
精密度：板内变异系数和板间变异系数均小于10%。
适用样本
适用于小鼠血清、血浆、细胞培养上清液等生物液体样本。
操作步骤
标准品稀释：按说明书进行梯度稀释。
加样：设置空白孔、标准孔和样本孔，加入相应液体。
温育：封板后37℃温育，使抗体与抗原充分结合。
洗涤：多次洗涤去除未结合物质。
加酶标抗体：加入HRP标记的抗体，避光温育。
显色：加入显色底物，避光显色。
终止：加入终止液终止反应。
测定：酶标仪在450nm波长下测定OD值，计算浓度。
注意事项
样本处理：避免溶血和反复冻融，确保样本质量。
试剂保存：试剂盒需在2-8℃避光保存，避免污染。
操作规范：使用一次性枪头，避免交叉污染；加样时避免触及孔壁。
安全防护：操作时佩戴防护设备，避免接触有害试剂。
应用领域
免疫学研究：研究PRF1在免疫细胞毒性中的作用。
疾病研究：探讨PRF1在免疫相关疾病中的机制。
试剂与样本准备阶段：
温度平衡（最容易被忽视的点）
操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。
后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。
样本处理
避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。
离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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