肠球菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

肠球菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于荧光定量PCR技术，针对肠球菌属（Enterococcus spp.）的保守序列设计特异性引物，通过染料法（如SYBR Green）实现高灵敏、高特异性的核酸定量检测。适用于环境、临床或科研样本中肠球菌的快速筛查和定量分析。

试剂盒组成

预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如FAM通道兼容染料）。

阳性对照：肠球菌通用标准DNA。

阴性对照：无核酸酶水。

引物混合液：针对肠球菌通用保守序列优化设计。

实验步骤

1. 样本准备

提供待测DNA模板（建议浓度10–100 ng/μL）。

2. PCR反应体系配制（20μL体系）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| 无核酸酶水 | 补足至20 |

3. 荧光定量PCR程序设置

仪器通道选择：

检测通道：FAM（染料法无需淬灭通道）。

参比荧光：None（ABI系列仪器勿选ROX）。

循环参数：

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 荧光采集 |

| 预变性 | 95℃ | 2 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 45 | 否 |

| | 60℃ | 30 sec | | 是 |

4. 结果分析

阈值设定：Baseline的Start值（建议3–15）、End值（建议5–20），调整阈值线至指数扩增期。

判读标准：

阳性：扩增曲线呈S型且Ct值≤35。

阴性：无扩增曲线或Ct值>35（需排除抑制物干扰）。

注意事项

避免反复冻融试剂，溶解后短暂离心混匀。

实验分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区分离），防止污染。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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