热带念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 热带念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Candida tropicalis Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3653 |
产品用途
用于快速、高灵敏检测热带念珠菌（Candida tropicalis）的核酸，适用于临床样本、环境样本或科研中的定性与定量分析。
技术原理
染料法检测：采用SYBR Green I荧光染料，与双链DNA结合后发射荧光信号，通过实时监测扩增曲线实现定量。
高特异性：优化引物设计避免与其他念珠菌种（如近平滑念珠菌）或微生物发生交叉反应。
灵敏度：检测下限可达0.1 pg（高表达靶标）或单拷贝（DNA样本）。
试剂盒组分
主反应混合液：预混2×荧光PCR缓冲液（含Mg²⁺、dNTPs及稳定剂）。
热启动DNA聚合酶：耐高温酶确保扩增特异性。
阳性对照：非活体DNA片段（10^8拷贝/μL），需按梯度稀释使用。
阴性对照：无核酸酶水。
专用稀释液：用于标准品梯度制备。
操作步骤
1. 样本准备
提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。
2. 阳性对照稀释（示例）
标记离心管（7-2号），依次加入45 μL稀释液。
7号管加入5 μL原液（10^8拷贝/μL），震荡混匀得10^7拷贝/μL，冰上保存。
同法逐级稀释至10^2拷贝/μL（6个梯度）。
3. PCR反应体系（20 μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×主反应混合液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA/对照 | 2 |
| 无核酸酶水 | 补至20 |
4. 扩增程序
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
熔解曲线分析：60℃~95℃（0.5℃/秒）
注意事项
分区操作：阳性对照稀释需在独立区域完成，避免气溶胶污染。
稳定性：预混液4℃保存不超过24小时，长期储存需-20℃避光。
假阴性判断：需同时运行阳性对照与阴性对照以验证结果有效性。
性能参数
线性范围：10^2~10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。
重复性：CV值＜5%（高浓度样本）。
适用仪器：兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。
储存与运输
温度：-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：12个月（见包装标注）。
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