检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光PCR技术,针对苛养木杆菌基因保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程,实现对样本中苛养木杆菌核酸的定性和定量分析。
产品名称
苛养木杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Xylella fastidiosa Dye-based qPCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR3689
试剂组成
苛养木杆菌扩增液:50μL ×1管
苛养木杆菌反应液:950μL ×1管
阳性对照(1×10^8拷贝/μL):1管(需单独储存,待其他试剂分装完成后加入)
实验步骤
样本处理:提取待测样本DNA,确保无污染。
反应体系配制:按比例混合扩增液、反应液及模板DNA。
PCR扩增:
程序设置:预变性(95℃, 5min)→ 循环扩增(95℃ 10s, 60℃ 30s,共40个循环)。
荧光信号采集:于60℃延伸阶段读取SYBR Green通道信号。
数据分析:
定量检测:以阳性对照浓度的对数(log值)为横轴,Ct值为纵轴绘制标准曲线,推算待测样本浓度。
定性检测:
阴性对照:Ct值≥40;
阳性对照:典型扩增曲线且Ct值≤30;
待测样本:Ct值≤35为阳性,≥40为阴性;35-40间需复测,复测Ct<40判为阳性。
注意事项
严格分区操作(试剂配制区、样本处理区、扩增区),避免交叉污染。
阳性对照需最后加入,防止气溶胶污染。
试剂盒仅限科研使用,不可用于临床诊断。
储存条件
-20℃避光保存,避免反复冻融。
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