经典猪瘟病毒(CSFV)RNA核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于猪瘟的快速诊断，特别适用于基层兽医站、养猪场或现场即时检测（POCT），无需复杂的热循环仪器。

与传统的荧光PCR相比，恒温荧光法（如RT-LAMP或RT-RAA）具有操作简便、反应速度快、对仪器要求低等优势。

 �� 产品核心信息

检测对象：经典猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）RNA。

检测原理：恒温荧光法。通常基于逆转录-环介导等温扩增（RT-LAMP）或逆转录-重组酶介导等温扩增（RT-RAA）技术。

针对CSFV基因组的保守区域（如5'-UTR或E2基因）设计多对特异性引物（LAMP）或引物与探针（RAA）。

荧光信号：反应过程中，随着靶标RNA的扩增，荧光信号（通常为FAM或SYTO系列染料）会同步增强。

适用仪器：

扩增仪：恒温荧光PCR仪（如ESE Quant tubescanner、Genie系列等）或普通PCR仪（梯度PCR仪亦可，设定恒温程序）。

结果判读：可通过仪器实时监测，部分试剂盒支持肉眼观察（如RAA结合便携式蓝光仪）。

检测样本：猪全血（抗凝）、血清、扁桃体、脾脏、淋巴结等组织匀浆液。

�� 试剂盒组成（以48T为例）

组分名称  规格  作用说明

RT-LAMP/RAA 反应液  500 μL x 1管  含dNTPs、缓冲液、Mg²⁺、逆转录酶（RT）、Bst DNA聚合酶（LAMP）或重组酶（RAA）等

引物/探针混合液  100 μL x 1管  含CSFV特异性引物（LAMP）或引物+探针（RAA）

阳性对照  50 μL x 1管  含CSFV目标基因片段的质粒或体外转录RNA

阴性对照  250 μL x 1管  无RNA酶水（RNase-free Water）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与RNA提取

组织/全血样本：取扁桃体、脾脏组织或抗凝全血约20 mg/μL，加入500 μL生理盐水或裂解液，匀浆。

RNA提取：

取200 μL匀浆液，使用病毒RNA提取试剂盒（离心柱法或磁珠法）进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱RNA。

关键点：提取的RNA应避免反复冻融，建议分装保存于-80℃。

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：无荧光信号增强，扩增曲线呈直线（无Ct值或Ct值≥设定阈值）。

阳性对照 (PC)：荧光信号明显增强，扩增曲线呈典型的“S”型，且Ct值 ≤ 15-20（恒温法通常扩增极快）。

2. 样本判定

阳性 (+)：荧光扩增曲线呈明显的“S”型，且 Ct值 ≤ 20-25（具体阈值视试剂盒性能而定）。表明样本中含有CSFV病毒。

阴性 (-)：无荧光信号增强，或Ct值 ≥ 30。

可疑 (±)：扩增曲线不典型或Ct值在临界范围内。建议复检。

⚠️ 注意事项

防污染：恒温扩增效率极高，极易受气溶胶污染。必须严格分区操作，加样时尽量避免产生气泡。

酶活性：恒温法所用酶（如Bst酶或重组酶）对温度敏感，配制体系时务必在冰上操作，且加完模板后应尽快放入预热的仪器中。

样本质量：组织样本中可能含有抑制物（如血红素、多糖），建议使用高质量的RNA提取试剂盒，并设置内参对照（若试剂盒包含）。

临床意义：检测结果需结合猪的临床症状（如高热、皮肤出血点、神经症状等）及流行病学背景进行综合判断。阳性结果需送实验室用qPCR或病毒分离进行最终确诊。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。