人OPG/TNFRSF11Belisa试剂盒
产品简介:
1. 试剂盒基本信息
检测目标：人骨保护素（Osteoprotegerin, OPG/TNFRSF11B），一种可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员，参与骨代谢和免疫调节
英文名称 | Human OPG/TNFRSF11B ELISA Kit | 产品类别 | Human/人Elisa试剂盒 |
货号 | A129735 | 规格 | 48T/96T |
检测方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）
样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、骨组织匀浆等
灵敏度：通常<15 pg/mL（不同品牌有差异）
检测范围：31.25-2000 pg/mL（部分试剂盒可扩展至15.6-4000 pg/mL）
特异性：仅检测天然或重组人OPG，不与RANKL或其他TNF受体家族成员交叉反应
2. 试剂盒组成（96T）
组分 规格 储存条件
预包被抗OPG抗体微孔板 96孔 2-8℃
重组人OPG标准品 冻干粉（0、31.25、62.5、125、250、500、1000、2000 pg/mL） -20℃
生物素标记抗OPG检测抗体 120 μL -20℃
HRP标记链霉亲和素 120 μL -20℃
TMB显色液 10 mL 4℃（避光）
终止液（1M H?SO?） 10 mL 室温
洗涤缓冲液（20×） 50 mL 室温
样本稀释液 20 mL 2-8℃
封板膜 2张 室温
3. 检测原理
抗原捕获：样本中OPG与预包被抗体结合
信号放大：生物素标记二抗与OPG结合
酶催化显色：HRP-链霉亲和素催化TMB显色
定量分析：450nm测OD值，浓度与吸光度成正比
4. 操作流程
标准品复溶及梯度稀释
加样100μL/孔，37℃孵育2小时
洗涤5次
加检测抗体100μL/孔，37℃1小时
加酶结合物100μL/孔，37℃30分钟
TMB显色15分钟（避光）
终止反应，30分钟内检测
5. 数据分析
使用四参数logistic曲线拟合
复孔CV应<10%
超出范围样本需调整稀释比例复测
6. 应用领域
骨代谢疾病：骨质疏松、Paget's病、骨转移瘤研究
心血管疾病：血管钙化机制研究
免疫调节：类风湿性关节炎等自身免疫病
肿瘤研究：多发性骨髓瘤、乳腺癌骨转移
7. 关键注意事项
样本处理：
血清/血浆：避免溶血，4℃离心后分装
骨组织：充分匀浆后离心取上清
实验优化：
高浓度样本建议1:10-1:100稀释
每板必须包含标准曲线和质控
干扰因素：
避免反复冻融（≤3次）
脂血样本需超速离心
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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：
稀释线性实验 (Linearity)：
操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。
预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。
干扰实验 (Interference Test)：
操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。
预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。
回收实验 (Recovery Test)：
操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。
预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。
常见问题解答 (FAQ)
Q1: 为什么要做“复孔”？
A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。
Q2: 样本需要稀释吗？
A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。
Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？
A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。
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