检测原理
本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物扩增猪轮状病毒A群的目标基因片段（预期产物长度约200bp），结合荧光染料实时监测扩增信号，实现病毒RNA的定性与定量检测。
产品名称 | 猪轮状病毒A群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Porcine Rotavirus Group A Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4140 |
试剂盒组成
RT-PCR预混液：包含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。
阳性对照：猪轮状病毒A群RNA标准品（1×10^6拷贝/μL）。
阴性对照：无RNA酶水。
其他辅助试剂：如RNA提取试剂（需自备或兼容市售提取试剂盒）。
实验步骤
1. 样本制备
样本数量：若检测N个样本，需设置N+2个提取反应（含1个阳性对照和1个阴性对照）。
阳性对照：取10μL阳性标准品稀释至与样本体积一致。
阴性对照：使用无RNA酶水。
RNA提取：建议使用兼容的RNA提取试剂盒，按说明书操作。
2. RT-PCR反应体系配制
每20μL反应体系包含：
预混液10μL
引物探针混合液2μL
RNA模板5μL
无RNA酶水补至20μL。
3. 扩增程序
逆转录：50℃ 15分钟
预变性：95℃ 3分钟
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
4. 结果分析
定量检测：通过标准曲线计算病毒拷贝数，线性范围≥5个数量级。
电泳验证：取5-10μL扩增产物进行1.5%-2.0%琼脂糖凝胶电泳，预期条带为200bp。
注意事项
实验需在无污染环境下操作，若阴性对照出现扩增，表明污染，实验无效。
避免反复冻融试剂，分装后使用。
不同批号试剂组分不可混用。
性能参数
灵敏度：可检测低至10^2拷贝/μL的病毒RNA。
特异性：与其他常见猪肠道病原体无交叉反应。
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