洋葱伯克氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 洋葱伯克氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Burkholderia cepacia Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4308 |
性能特点
即开即用：用户仅需提供DNA模板，预混引物及反应体系优化完成。
高特异性：针对洋葱伯克氏菌保守基因区域设计引物，避免非特异性扩增。
高灵敏度：SYBR Green染料法检测，灵敏度显著高于常规PCR。
闭管操作：减少气溶胶污染风险。
兼容性广：适配ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。
试剂盒组成
2×qPCR Magic Mix：500 μL（预混含SYBR Green染料、dNTPs、聚合酶等）。
荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（黄盖）。
qPCR引物混合液：100 μL（靶向洋葱伯克氏菌特异性序列）。
阳性质控品：50 μL（含目标基因片段）。
阴性质控品：50 μL（无核酸酶水）。
说明书：1份。
注意：不同批号组分不可混用，避免反复冻融（建议分装保存）。
储存与运输
保存条件：-20℃±5℃避光保存，有效期12个月，冻融次数≤7次。
运输条件：低温冰袋（2~8℃）运输，严禁反复冻融。
实验步骤
样本制备
采集样本（如胃液分泌物、培养物等）需符合《临床微生物样本采集规范》。
短期保存于-20℃，长期保存需-70℃以下（≤6个月）。
反应体系配制
按20μL体系混合：10μL 2×预混液、2μL引物混合液、2μL模板DNA、6μL无核酸酶水。
PCR扩增程序
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（信号采集）；
熔解曲线分析（可选）。
数据分析
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30且有典型扩增曲线；
样本Ct≤35判为阳性，Ct≥40为阴性；35<Ct<40需复测确认。
注意事项
实验分区操作（样本处理区、扩增区），避免污染。
使用无核酸酶耗材（吸头、离心管等）。
熔解曲线分析可辅助验证扩增特异性。
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