耶氏肺孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 耶氏肺孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pneumocystis jirovecii Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4334 |
产品用途
科研使用，适用于耶氏肺孢子虫的定性及定量检测。
产品特点
高灵敏度：优化的引物设计可检测低至10³拷贝/μL的模板，无需增菌。
特异性强：引物基于保守序列设计，与其他病原体无交叉反应。
即开即用：预混PCR反应液（含染料），仅需提供DNA模板。
双重检测功能：支持定性和定量分析，定量线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。
内控设计：提供阳性对照（非活体DNA片段），避免假阴性干扰。
包装组分
| 编号 | 成分 | 规格/包装 | 备注 |
| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） | 含荧光染料、dNTPs |
| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄色） | 稀释模板用 |
| 试剂三 | 引物混合液 | 100 μL（白盖） | 特异性引物及探针 |
| 试剂四 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） | 非传染性DNA片段 |
| —— | 说明书 | 1份 | 含操作流程及数据分析方法 |
操作流程
1. 阳性对照稀释（示例：10²~10⁷梯度）
在独立洁净区操作，避免污染。
取6管，分别标记为2~7号，每管加45 μL模板稀释液。
7号管加5 μL原液（10⁸拷贝/μL），涡旋混匀得10⁷拷贝/μL梯度，依次稀释至10²拷贝/μL。
2. PCR反应体系配制（20μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| PCR MagicMix 3.0 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| 超纯水 | 6 |
3. 扩增程序（以常见仪器为例）
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
溶解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温5秒。
注意事项
避免污染：阳性对照与样本分区域操作，使用带滤芯枪头。
质量控制：每批实验需包含阴性对照（超纯水替代模板）。
数据判读：Ct值≤35且溶解曲线单峰视为阳性。
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