液化沙雷菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 液化沙雷菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Serratia liquefaciens Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4346 |
产品基本信息
规格：50次/盒（20μL体系/次）
用途：科研检测，适用于液化沙雷菌的定性及定量分析。
保存条件：-20℃避光保存，低温运输。
有效期：12个月（以具体批次为准）。
产品特点
即开即用：仅需提供样品DNA模板，预混优化引物、染料及反应体系。
高灵敏度与特异性：引物针对液化沙雷菌高度保守区设计，避免交叉反应。
双重检测功能：支持定性（病原体筛查）和定量（拷贝数分析，线性范围≥5个数量级）。
质控完善：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于排除假阴性。
兼容性：适配多数核酸纯化试剂盒，适用于复杂样本（如环境或临床样本）。
操作步骤
标准曲线制备（定量检测需执行）
标记6管（7号至2号），每管加45 μL荧光PCR模板稀释液。
梯度稀释阳性对照：
7号管加5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡得1×10^7拷贝/μL标准品。
依次稀释至2号管（1×10^2拷贝/μL），冰上保存。
样本DNA制备
自选方法提取样本DNA，建议设置N+2管（含阳性/阴性对照）。
纯化后DNA应避免降解，建议浓度≥50 ng/μL。
qPCR反应体系（20μL/管）
组分：预混PCR缓冲液、dNTPs、优化引物、染料、Taq酶。
程序（以无热盖仪器为例）：
预变性：93℃ 3-5 min；
扩增循环（30-35次）：93℃ 40 s → 58℃ 30 s → 72℃ 60 s；
终延伸：72℃ 5 min。
数据分析
定性：Ct值≤35且扩增曲线呈S形判为阳性。
定量：根据标准曲线计算样本拷贝数。
注意事项
操作分区：样本制备、反应配置需在不同区域进行，避免污染。
试剂解冻后需涡旋混匀，避免反复冻融。
阴性对照应无扩增，阳性对照Ct值需在预期范围内。
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