检测原理
本试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术，针对塞内卡病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。通过实时监测荧光强度变化，实现对病毒RNA的定性和定量检测。
产品名称 | 塞内卡病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Senecavirus (SVA) Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4849 |
主要组成
RT-PCR反应液：含缓冲液、dNTPs等，规格为437.5 μL（25 T/盒）或875 μL（50 T/盒）。
混合酶液：含逆转录酶、Taq DNA聚合酶等，规格为62.5 μL（25 T/盒）或125 μL（50 T/盒）。
阳性对照：含塞内卡病毒靶基因的质粒（1×10^8拷贝/μL），40 μL/管。
阴性对照：灭菌纯水，40 μL/管。
说明书：1份。
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 系列（如7500、QuantStudio）
Bio-Rad 系列（如CFX96）
Roche LightCycler 480
Agilent Stratagene MX系列
杭州博日系列等
样本要求
样本类型：血液、血清、肌肉或内脏组织。
处理要求：
液体样本：直接离心取上清。
组织样本：研磨匀浆后离心（3000 rpm，10分钟）取上清。
保存条件：
短期：2-8℃保存不超过24小时。
长期：-80℃冻存，避免反复冻融。
检验步骤
试剂准备
解冻试剂并离心混匀，按反应数（n=样本数+3）配制混合液（每反应含RT-PCR反应液17.5 μL、混合酶液2.5 μL）。
分装20 μL/管至PCR反应管。
样本处理
使用商业化RNA提取试剂盒提取样本RNA。
加样
每反应管加入5 μL样本RNA或对照品，终体积25 μL。
PCR扩增
程序设置：
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）
结果判读
定量分析：以标准曲线（10^2-10^7拷贝/μL）计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。
阳性对照需最后添加，防止气溶胶污染。
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
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关键字： 塞内卡病毒;染料法荧光定量;RT-PCR试剂盒;