虾虹彩病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

虾虹彩病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，专用于虾虹彩病毒的定性和定量检测。具有高灵敏性（分析灵敏度可达100拷贝/反应）、高特异性（引物针对病毒保守区设计，避免交叉反应），适用于ABI、Bio-Rad等主流荧光定量PCR仪。

试剂盒组成

核心组分：

探针法qPCR缓冲液

qPCR酶混合液

荧光标记探针及引物混合液

阳性对照（无传染性DNA片段）

储存条件：-20℃±5℃避光保存，有效期12个月。

实验步骤

1. 试剂准备与标准曲线稀释

按10倍梯度稀释阳性对照（10E1~10E6拷贝/μL），需在独立区域操作以避免污染。

使用带芯枪头依次稀释，每步震荡混匀后冰上暂存。

2. 样本处理

建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），采用核酸提取试剂纯化RNA/DNA模板。

3. PCR反应体系（20μL/管）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样本RNA/DNA模板 | 5 μL | — | — |

| 超纯水 | — | 5 μL | — |

| 标准曲线稀释液 | — | — | 5 μL |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且具典型扩增曲线。

样本Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39<Ct<40需复测。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、加样），避免交叉污染。

使用前充分混匀组分并短暂离心，避光保存反应液。

实验后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒工作台。

所有废弃物按生物安全规范处理。

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