紫苏梗探针法PCR鉴定试剂盒

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。当Taq酶切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现靶序列的定量检测，标准曲线法计算模板浓度。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 紫苏梗特异性引物混合液 | 100 μL |

| 紫苏梗探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（10²-10⁷拷贝/μL梯度）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（需独立操作区，避免污染）。

2. RNA提取

推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2个样本）。

3. qRT-PCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| RNA模板/标准品 | 5 μL | - | 5 μL |

| 超纯水 | - | 5 μL | - |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| PCR扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号） |

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性。

注意事项

操作需在无核酸污染环境下进行，使用带滤芯枪头。

避免反复冻融试剂，分装后保存。

阳性对照需最后加入，防止交叉污染。

实验废弃物需按生物危害品处理。

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