技术原理
本试剂盒采用实时荧光定量PCR技术，基于TaqMan探针法原理：
探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团并被磷酸化
PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割与靶序列结合的探针
探针切割后报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号
通过监测荧光信号强度变化实现对靶序列的定量和定性分析
产品名称 | 栀子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Gardenia jasminoides Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4902 |
产品特点
即开即用：用户只需提供样品RNA模板
高灵敏度：优化的引物和探针设计
高特异性：针对栀子高度保守区设计，避免交叉反应
双重应用：支持定性和定量分析
质量控制：提供阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）用于排除假阴性
试剂盒组成
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 试剂四 | 栀子探针法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 试剂五 | 栀子qRT-PCR探针 | 50μL |
| 试剂六 | 栀子探针法qRT-PCR阳性对照 | 50μL |
| - | 产品说明书 | 1份 |
实验操作流程
标准曲线样品制备（6个10倍梯度稀释）
标记6个离心管（7-2号）
各管加入45μL稀释液
7号管加入5μL阳性对照，震荡混匀→1×10⁷拷贝/μL
依次稀释至2号管（1×10²拷贝/μL）
冰上保存备用
样品RNA制备
建议设置N+2个提取（N样品+阳性对照+阴性对照）
使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样品RNA
qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管(N+2) | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| qRT-PCR探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 样品RNA | 5μL | - | - |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
| 标准品 | - | - | 5μL |
PCR反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
|------|------|------|-------|
| 逆转录 | 50℃ | 30min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 15sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 1min | 40 |
| 信号采集 | 60℃ | - | 40 |
结果分析
定量分析
以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线
根据样品Ct值推算初始模板量
定性分析
阴性对照：Ct≥40
阳性对照：典型扩增曲线，Ct≤30
样品判定：
Ct≤35：阳性
Ct≥40：阴性
35<Ct<40：需重复检测
注意事项
操作分区进行（试剂准备区、样品处理区、扩增区）
使用带滤芯枪头，避免交叉污染
反应液避光保存，避免反复冻融
阳性对照最后加入，防止污染
实验废弃物应按生物危害物处理
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断
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