大肠杆菌细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)
商品属性
产品名称 | 大肠杆菌细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参) | 英文名称 | Escherichia coli Cell Genomic DNA Residue Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit (Without Internal Control) |
规格 | 50T | 货号 | PR4800 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测大肠杆菌（Escherichia coli）细胞基因组DNA残留，适用于科研领域。试剂盒通过优化引物与探针设计，确保高灵敏度和特异性，可检测低至50拷贝/μL的DNA，线性范围覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
产品特点
即开即用：用户仅需提供DNA模板，无需额外优化反应体系。
高灵敏度与特异性：引物针对大肠杆菌基因组保守区设计，避免与其他微生物DNA交叉反应。
双重检测模式：支持定性（阴阳性判定）与定量（标准曲线法）分析。
防污染设计：提供无传染性阳性对照（10^7拷贝/μL）及专用稀释液，降低假阳性风险。
兼容性：适配多数商业化DNA提取试剂盒，推荐使用带芯枪头操作。
包装规格
| 成分 | 规格 |
| qPCR缓冲液 | 500 μL |
| qPCR酶混合液 | 50 μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 引物-探针干粉 | 50次反应 |
| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL |
操作流程
1. 标准曲线制备（定量分析需选做）
稀释阳性对照：按10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），独立区域操作，避免污染。
标记离心管：依次编号6至1，每管加入45 μL稀释液，逐级稀释5 μL阳性对照。
2. 样本DNA提取
推荐设置阴性对照（NC）与阳性对照（PC），PC为阳性对照1000倍稀释液。
使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样本。
3. qPCR反应体系（20 μL）
分区操作：试剂配制、模板添加、扩增需在不同区域进行。
反应程序：
逆转录：50℃ 10 min（若含RNA步骤）；
预变性：95℃ 10 min；
40循环：95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM通道信号）。
4. 数据分析
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 39，典型扩增曲线；
阴性：Ct ≥ 40或无Ct值；
灰区（39<Ct<40）：需复测确认。
储存与运输
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；阳性对照单独存放。
样本运输：短期（<7天）2–8℃冰袋运输，长期保存需-70℃（避免反复冻融）。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需严格分区，防止交叉污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照，监控假阴性或污染。
防污染措施：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇清洁台面及移液器。
局限性：
结果受样本质量、提取效率及操作规范影响；
不适用于临床诊断，仅限科研用途。
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