草地贪夜蛾细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)
商品属性
产品名称 | 草地贪夜蛾细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参) | 英文名称 | Spodoptera frugiperda Cell Genomic DNA Residue Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit (Without Internal Control) |
规格 | 50T | 货号 | PR4804 |
产品概述
本产品是专为检测草地贪夜蛾(Sf9)细胞基因组DNA残留设计的探针法荧光定量PCR试剂盒，采用实时荧光定量PCR技术，可实现对DNA样品的高灵敏度定量和定性分析。本试剂盒不含内参，适用于科研用途。
产品规格
规格：50次20μL体系反应
保存条件：-20℃避光保存
保质期：1年
运输条件：低温运输
产品特点
即开即用设计，用户只需提供样品DNA模板
优化引物设计，灵敏度高，检测限可达1×10E2拷贝/μL
提供阳性对照，便于区分假阴性样品
特异性强，不会与其他生物样本DNA发生交叉反应
适用于定性和定量检测，定量线性范围达5个数量级
兼容大多数市售核酸提取试剂盒
实验原理
本试剂盒基于TaqMan探针技术原理，在PCR反应体系中加入特异性荧光探针。探针与靶序列特异性杂交后，在PCR扩增过程中被Taq酶水解，释放荧光信号，通过实时监测荧光信号积累来定量分析目标DNA。
试剂盒组分
qPCR预混液(含dNTPs、Taq DNA聚合酶等)
特异性引物对
TaqMan探针
阳性对照(1×10E8拷贝/μL)
DEPC-H2O(阴性对照)
使用方法
DNA提取(样本制备区)
使用自选方法提取纯化样品DNA，推荐使用市售核酸提取试剂盒。
标准曲线制备(样本制备区)
标记6支离心管(7-2号)
每管加入45μL DEPC-H2O
按10倍梯度稀释阳性对照，获得1×10E7至1×10E2拷贝/μL的标准品系列
若仅需定性检测，将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可
反应体系配制(试剂准备区)
计算所需反应管数(N个样品+1个阴性对照+6个阳性对照)
每管加入18μL预混液
转移至样本准备区
模板添加(模板添加区)
每管加入2μL相应模板
加样顺序：阴性对照→待测样品→阳性对照
短暂离心混匀
PCR扩增(扩增及产物分析区)
将反应管置于qPCR仪中
运行以下程序：
95℃ 10min(预变性)
95℃ 15sec → 60℃ 1min，40个循环
结果分析
定量分析
以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线
根据样品Ct值推算DNA浓度
定性分析
阳性对照：Ct值<30，典型S型扩增曲线
阴性对照：Ct值>38或无Ct值
样品判定：
阳性：Ct值<35，明显指数增长
阴性：Ct值>38或无Ct值
可疑：Ct值35-38，需复检
注意事项
实验操作需在分区(样本制备区、试剂准备区、扩增区)进行，避免污染
使用前所有组分需完全融化，混匀并短暂离心
反应液需避光保存，避免气泡产生
使用一次性吸头、手套和专用工作服
实验后使用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台
阳性对照需单独存放，防止污染其他组分
本产品仅限科研使用
质量控制
阴性对照：Ct值应>38或无Ct值
阳性对照：Ct值应<30
标准曲线相关系数R²应≥0.98
扩增效率应在90-110%之间
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