产品原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法原理：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：荧光强度与扩增产物量成正比，通过Ct值（阈值循环数）实现续断RNA的定量或定性检测。
产品名称 | 续断探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Dipsaci Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4933 |
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对续断高度保守序列设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，用户仅需提供RNA模板。
内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），区分假阴性结果。
适用范围：科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |
| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 试剂四 | 续断探针法qRT-PCR引物混合液 | 100 μL |
| 试剂五 | 续断qRT-PCR探针 | 50 μL |
| 试剂六 | 续断阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |
实验步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2–10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. RNA提取
自备样品RNA，建议使用柱式提取法，确保纯度（A260/A280≈2.0）。
3. qRT-PCR反应（20 μL体系）
反应体系：
缓冲液10 μL + 酶混合液2 μL + 探针1 μL + 引物混合液2 μL + RNA模板5 μL。
循环程序：
逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 扩增（40循环）：94℃ 15 sec，60℃ 1 min（采集FAM信号）。
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型；
阴性：Ct≥40或无扩增；
可疑结果（35<Ct<40）需复测。
注意事项
操作需在无菌环境下进行，避免RNase污染。
试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。
实验废弃物需按生物安全规范处理。
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