商品属性
产品名称 | 6磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）测试盒 | 产品货号 | BH-961122 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 辅酶Ⅱ系列 |
测试方法 | 微量法、紫外分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
6磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）是磷酸戊糖途径（PPP）的关键酶，主要功能包括：NADPH合成：催化6-磷酸葡萄糖酸氧化脱羧生成核酮糖-5-磷酸和NADPH，为细胞提供还原力抗氧化防御：NADPH作为谷胱甘肽还原酶、硫氧还蛋白还原酶的辅酶，维持细胞氧化还原稳态逆境响应：在干旱、高温、盐胁迫等逆境条件下，6PGDH活性显著增加，增强细胞抗氧化能力能量代谢：参与细胞能量代谢调节，影响生长速率和细胞活力疾病关联：6PGDH活性异常与肿瘤、糖尿病、心血管疾病等密切相关
测定原理
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH： 6-磷酸葡萄糖酸+NADP+→6PGDH核酮糖-5-磷酸+CO2+NADPH+H+6-磷酸葡萄糖酸+NADP+6PGDH核酮糖-5-磷酸+CO2+NADPH+H+ NADPH在340nm处有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。
自备仪器与试剂
必备仪器
紫外分光光度计/酶标仪（340nm检测通道）
台式高速离心机（≥8000g）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
超声破碎仪（用于细胞/细菌样本）
必备耗材
1mL石英比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
研钵/组织匀浆器（冰浴专用）
自备试剂
蒸馏水/去离子水
生理盐水（0.85% NaCl）
液氮（用于样本速冻）
样本前处理方法
动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取0.1g组织，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测若酶活性过高，可用提取液稀释1-5倍后测定
血清/血浆样本血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取血清上清血浆样本：加入抗凝剂（肝素/EDTA）后3000g 4℃离心10min，取上清样本可直接检测，无需提取处理；活性过高时可用生理盐水稀释
细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清加入1mL预冷提取液重悬，冰浴超声破碎（功率20%，超声3s/间隔10s，重复30次）8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测
测定操作步骤
紫外分光光度法操作
试剂准备：
试剂一：液体19mL×1瓶，4℃保存
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存
将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融
预温育：
分光光度计预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零
试剂一置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中预热10min
反应启动：
取比色皿，依次加入：试剂一0.9mL + 样本0.1mL
混匀，在340nm波长下记录第10s吸光值A1和第190s吸光值A2
计算ΔA：ΔA = A2 - A1
微量法（酶标仪）操作96孔板每孔加入：试剂一190μL + 样本10μL37℃预温育5min，加入样本后立即混匀设置动力学模式，340nm处连续读取10个循环（每1min读取1次）计算吸光度增加速率（ΔA/min）
酶活力计算方法
单位定义
nmol/min/mL：每mL血清(浆)每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位
nmol/min/mgprot：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位
nmol/min/g鲜重：每g组织每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位
nmol/min/10⁴cell：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位
计算公式
6PGDH活性(nmol/min/mL)=ΔA×V反总×109ε×d×V样×T6PGDH活性(nmol/min/mL)=ε×d×V样×TΔA×V反总×109
ΔA：吸光度变化值（A2 - A1）
V反总：反应体系总体积（1.0mL）
ε：NADPH摩尔消光系数（6.22×10³ L/(mol·cm)）
d：比色皿光径（1cm）
V样：测定时加入样本体积（0.1mL）
T：反应时间（3min）
简化公式
血清(浆)样本：6PGDH（nmol/min/mL）= 2143.6 × ΔA
组织样本（蛋白浓度）：6PGDH（nmol/min/mgprot）= 2143.6 × ΔA ÷ Cpr
组织样本（鲜重）：6PGDH（nmol/min/g鲜重）= 2143.6 × ΔA ÷ W
细胞/细菌样本：6PGDH（nmol/min/10⁴cell）= 1.072 × ΔA
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免酶失活；-80℃可保存1个月
匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃
避免样本接触金属离子，可用EDTA螯合
试剂使用：
试剂二和试剂三需现配现用，-20℃分装保存可稳定1个月
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
试剂二溶解后4℃可保存一周，避免反复冻融
测定过程：
反应温度严格控制在37℃（最适温度）或25℃（其他物种）
若ΔA值大于0.5，需稀释样本后重新测定，提高检测灵敏度
若ΔA值小于0.005，可延长反应时间到5min或10min
质量控制：
每次实验设置空白对照（提取液替代样本）和阳性对照
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质、样本处理是否正确
实验前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验
公司正在出售的产品
甲状旁腺1-34检测试剂盒 PTH 1-34 ELISA Kit | CT26小鼠结肠癌细胞 |
人血吸虫ELISA试剂盒 | 人原代阴道壁成纤维细胞 |
人神经生长因子ELISA试剂盒 | 人阴道壁成纤维细胞 |
人神经丝蛋白ELISA试剂盒 | 人小细胞肺癌NCI-H526(STR鉴定正确) |
人神经损伤诱导蛋白1ELISA试剂盒 | Anglne (人卵巢癌细胞) (STR鉴定正确) |
人神经肽BELISA试剂盒 | 人冠状动脉内皮细胞 |
人神经肽YELISA试剂盒 | 人冠状动脉平滑肌细胞 |
人死骨片1ELISA试剂盒 | 人原代髓核细胞永生化 |
人神经型一氧化氮合成ELISA试剂盒 | 大鼠脊髓微血管内皮细胞 |
人组织蛋白GELISA试剂盒 | C643 (人甲状腺癌细胞) (STR鉴定正确) |
人神经营养因子4ELISA试剂盒 | A431(A-431)人表皮癌细胞 |
人神经元特异性烯醇化ELISA试剂盒 | 95-D人高转移肺癌 细胞专用培养基 |
人肾病蛋白ELISA试剂盒 | 6磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）测试盒NCI-H446人小细胞肺癌细胞 |
人肾上腺suELISA试剂盒 | 猪原代睾丸间质细胞 |
人肾上腺su能a1A受体ELISA试剂盒 | 人乳腺癌细胞MDA-MB-361(STR鉴定正确) |
甲状旁腺1-34检测试剂盒 PTH 1-34 ELISA Kit | CT26小鼠结肠癌细胞 |
人血吸虫ELISA试剂盒 | 人原代阴道壁成纤维细胞 |
人神经生长因子ELISA试剂盒 | 人阴道壁成纤维细胞 |
人神经丝蛋白ELISA试剂盒 | 人小细胞肺癌NCI-H526(STR鉴定正确) |
关键字： 6磷酸葡萄糖酸脱氢酶;6PGDH;测试盒;
派瑞曼pyram?是上海博湖生物科技有限公司（Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.，China）的产品品牌。
派瑞曼pyram?是一家化学、生化和材料科学等领域的科研用研发产品的制造商和供应商,我们的产品在相当宽的基础科学领域得到广泛的应用。 客户包括学术界、工业界和政府的研究和开发实验室以及制药、生物技术、化工/石化行业等具商业规模的企业。
派瑞曼pyram?除包括化学、分析化学、生命科学、材料科学和病理科学产品。质量是所有产品和服务最关键的组成部分,我们通过质量和实力赢得客户的信赖。产品的质量是企业的生命。
公司秉承"专注品质、诚信为本、服务至上、合作共赢"的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务！