商品属性
产品名称 | 植物总酚（Tp）测试盒 | 产品货号 | BH-961169 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
植物总酚是植物中多酚类化合物的总称，具有多方面的生物学和医学意义：抗氧化活性：清除自由基，抑制氧化应激，保护细胞免受氧化损伤植物抗逆性：参与植物对干旱、盐渍、重金属、病原菌等逆境胁迫的响应营养价值：是重要的营养成分，具有降血脂、降血糖、抗肿瘤等多种保健功能食品保鲜：天然抗氧化剂，可延长食品保质期，减少化学防腐剂使用工业应用：应用于化妆品、医药、保健品等领域，开发天然活性成分
测定原理
采用福林-酚法（Folin-Ciocalteu法），在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，该化合物在760nm处有最大吸收峰，吸光度与总酚含量成正比，通过测定760nm处的吸光度值，即可计算样本中总酚的含量。
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂一 液体40mL×1瓶 含福林-酚试剂（钨钼酸混合液），与酚类物质反应生成蓝色化合物
试剂二 液体80mL×1瓶 含20%碳酸钠溶液，提供碱性反应环境
试剂三 液体1mL×1支 含100μg/mL没食子酸标准品，用于建立标准曲线
说明书 1份 包含详细实验步骤、计算方法和注意事项
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度计/酶标仪（760nm检测通道）
低温离心机（≥10000g）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
研钵/组织匀浆器（冰浴专用）
超声破碎仪（可选，用于植物提取物制备）
必备耗材
1mL玻璃/石英比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
手术剪/镊子（用于植物样本处理）
自备试剂
蒸馏水/去离子水
60%乙醇溶液（用于植物样本提取）
生理盐水（0.85% NaCl）
样本前处理方法
植物组织样本取新鲜植物组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL 60%乙醇，冰浴匀浆80℃水浴提取30min，期间振荡2-3次10000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若总酚含量过高，可用60%乙醇稀释1-10倍后测定
干燥植物样本取干燥植物粉末约0.05g，加入2mL 60%乙醇超声波提取30min（功率200W，工作5s，间隔10s）10000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测提取液可直接检测或根据需要稀释
植物提取物/食品样本液体样本：直接取100μL样本加入900μL 60%乙醇，振荡混匀后离心取上清固体样本：取约0.1g样本，加入1mL 60%乙醇，冰浴匀浆后沸水浴提取10min离心取上清液置冰上待测，可直接检测或根据需要稀释
测定操作步骤
标准曲线建立将100μg/mL没食子酸标准品用60%乙醇稀释成0、10、20、40、60、80、100μg/mL系列浓度取比色管/96孔板，加入标准品溶液0.1mL + 试剂一0.5mL，充分混匀，室温放置3-5min加入试剂二0.4mL，充分混匀，室温避光反应60min760nm波长下测定吸光度，以没食子酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线
样本测定（常规法）分光光度计预热30min，调节波长到760nm，蒸馏水调零取比色管，分别加入样本0.1mL + 试剂一0.5mL，充分混匀，室温放置3-5min加入试剂二0.4mL，充分混匀，室温避光反应60min测定760nm波长下吸光度（A样）空白管：加入60%乙醇0.1mL + 试剂一0.5mL + 试剂二0.4mL，同样处理（A空白）
样本测定（微量法）取96孔板，设置空白孔、标准品孔、样本孔空白孔：加入60%乙醇10μL + 试剂一50μL，混匀后加入试剂二40μL样本孔：加入样本10μL + 试剂一50μL，混匀后加入试剂二40μL充分混匀，室温避光反应60min，测定760nm波长下吸光度（A空白、A样）若A样超出标准曲线范围，需用60%乙醇稀释样本后重新测定
结果计算方法
单位定义
mg没食子酸当量/g鲜重：每克组织鲜重中总酚含量相当于没食子酸的质量
mg没食子酸当量/mL：每毫升样本中总酚含量相当于没食子酸的质量
计算公式标准曲线法： 总酚含量(μg/mL)=A样−A空白ΔA标准×C标准×D总酚含量(μg/mL)=ΔA标准A样−A空白×C标准×D
ΔA标准：标准品吸光度变化值
C标准：标准品浓度（μg/mL）
D：样本稀释倍数（未稀释则为1）按组织鲜重计算： 总酚含量(mg没食子酸当量/g鲜重)=总酚含量(μg/mL)×V总W×1000总酚含量(mg没食子酸当量/g鲜重)=W×1000总酚含量(μg/mL)×V总
V总：样本提取液总体积（mL）
W：组织鲜重（g）
性能指标
指标 要求
线性范围 0~100μg/mL没食子酸当量，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.5μg/mL
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免多酚类物质氧化分解；-80℃可保存1个月
提取过程中需避免光照和高温，防止酚类物质降解
样本处理过程中需避免接触金属器具，防止酚类物质与金属离子络合
试剂使用：
福林-酚试剂需现配现用，或按说明书要求稀释
碳酸钠溶液需密闭保存，避免吸收空气中的二氧化碳而失效
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
反应时间需严格控制在60min，避免显色过度或不足
反应需在避光条件下进行，防止蓝色化合物分解
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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