产品介绍:
产品性质与用途
检测目标:专门用于检测 BAR基因(Bialaphos Resistance gene,双丙氨膦抗性基因)。
应用背景:BAR基因(也称为PAT基因)是一种常用的抗除草剂筛选标记基因。它广泛存在于转基因玉米、大豆、油菜、棉花等作物中,能使植物对除草剂(如草铵膦)产生抗性。
产品名称 | BAR基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 货号 | AP3401 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 48T |
主要用途:用于食品、饲料、农产品及加工品中转基因成分的定性筛查与鉴定。
技术原理:采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术,基于TaqMan荧光探针法。
优势:特异性极强(引物和探针双重识别),定量线性范围宽,结果判读客观,是目前国内外转基因检测标准中推荐的主流方法。
操作流程与关键参数
根据同类产品的说明书,操作通常包括以下步骤:
步骤 操作内容 关键参数/注意事项
1. 样本制备 从待测样本(如粮食、饲料、食品)中提取基因组DNA。 必须使用高质量的DNA提取试剂盒,且需防止交叉污染。
2. 试剂配制 将PCR反应液、引物和探针(通常已预混)分装至PCR管中。 需在冰上操作,避光保存反应液,避免反复冻融。
3. 加样 向反应管中加入提取的DNA模板(通常为5μL)。 必须设置对照:阴性对照(无菌水)和阳性对照(含BAR基因的质粒或标准品)。
4. 扩增反应 在荧光定量PCR仪上运行程序。 荧光基团:FAM(通常)
淬灭基团:TAMRA 或 BHQ
循环条件:通常为95℃预变性5分钟,随后40个循环(95℃ 15秒 → 60℃ 60秒)。
5. 结果判读 分析扩增曲线和Ct值。 阳性:Ct值<35-38,扩增曲线呈典型“S”型。
阴性:Ct值≥40或无Ct值。
可疑:38≤Ct值<40,需重复实验。
4. 性能特点
高特异性:针对BAR基因保守区域设计,与其他非靶标基因组无交叉反应。
高灵敏度:检出限通常可达 0.1%(质量分数),部分产品灵敏度可达 100-500拷贝/毫升。
适用范围广:适用于农作物植株、种子、饲料、米粉、面粉、豆制品、罐头食品等多种样本类型。
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注意事项
实验操作规范
严格分区操作:试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离,防止气溶胶污染。
每次实验需设置阴性对照(无模板DNA)、阳性对照(已知PAT基因样本)及空白对照(仅缓冲液)。
加样时避免过量或不足,推荐低容量反应管以提高热传导率。
污染防控
定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染,可通过擦拭采样后扩增验证。
扩增产物需在专用区域处理,避免开盖时形成气溶胶污染。
关键字: BAR;基因 ;核酸检测试剂盒; PCR-荧光探针法;
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