一、核心属性
二、光学特性
TJ-AF-568发出明亮的橙红色荧光,其精确的激发和发射波长因测量条件略有差异,核心数据如下:
三、核心特点与优势
1、高亮度与卓越光稳定性:具有高量子产率(0.69)和优异的光稳定性。其偶联物比其他光谱相似的荧光染料偶联物更明亮、光稳定性更强。长时间曝光不易光漂白。
2、优异的水溶性:作为磺化罗丹明衍生物,分子中的磺酸基团使其高度亲水,在水相环境中性能出色,标记蛋白不会引起蛋白聚集。
3、宽的pH稳定性:在pH 4至10的广泛范围内,荧光信号保持稳定。
4、高标记效率:可以在蛋白质上实现高摩尔比标记而不会发生显著的自淬灭,从而形成更明亮的偶联物。
5、与RFP滤光片组匹配良好:其光谱与红色荧光蛋白(RFP)的滤光片组兼容。
6、多色兼容性:与TJ-AF-488等绿色染料可同时使用而无明显信号干扰,适合多色荧光实验。
四、主要应用领域
TJ-AF-568是生命科学研究的通用工具,应用极为广泛:
1、免疫检测:用于免疫荧光 (IF/ICC)、免疫组化 (IHC)、流式细胞术 (FACS)和荧光Western Blot。
2、细胞成像:适用于共聚焦显微镜及超分辨率显微镜(如dSTORM)。
3、细胞示踪与标记:酰肼(Hydrazide) 衍生物可作为细胞示踪剂,通过显微注射等方式载入细胞。
4、核酸研究:用于标记寡核苷酸探针,进行荧光原位杂交 (FISH) 和实时PCR。
5、活细胞成像:良好的光稳定性使其适合长时间的活细胞观察,跟踪细胞动态过程。
6、多色荧光实验:在多重荧光实验中可与绿色染料(如TJ-AF-488)同时使用而无明显信号干扰。
五、常见活性衍生物
为方便标记不同生物分子,TJ-AF-568被制成多种活性衍生物:
六、使用与储存建议
1、储存条件:作为粉末,应在 -20°C 下干燥、避光保存。NHS酯衍生物可分装保存,避免反复冻融以保持活性。
2、标记反应(以NHS酯标记蛋白为例):
(1)溶剂:NHS酯通常溶于高质量无水DMF或DMSO。
(2)缓冲液:在0.1–0.2 M 碳酸氢钠缓冲液(pH 8.3) 中室温反应1小时。
(3)蛋白浓度:建议蛋白浓度至少为2 mg/mL以获得最佳标记效果。
(4)比例优化:建议尝试三种不同的染料与蛋白摩尔比(如10:1),以获得最佳标记度。
(5)纯化:标记后的抗体等偶联物可通过凝胶过滤层析(如Sephadex™ G-25)进行纯化。
3、注意事项:
(1)所有操作需严格避光。
(2)NHS酯衍生物对水敏感,应避免长时间暴露在水溶液中。
(3)含伯氨基的缓冲液(如Tris、甘氨酸)会抑制NHS酯反应。
关键字: 新型荧光染料;
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