基本信息
中文名称：miRNA茎环染料法荧光定量PCR试剂盒
货号：P-PR1431
规格：200反应、400反应
英文名称：miRNA Stem-loop Dye-based Quantitative PCR Kit
作用机制：设计与miRNA序列互补的茎环结构反转录引物，该引物与miRNA特异性结合后进行反转录，生成含有茎环结构的cDNA，再用特异性引物对cDNA进行PCR扩增，通过染料与扩增的双链DNA结合产生的荧光信号定量miRNA。
适用样本：含miRNA的总RNA样本，如动植物组织总RNA、细胞系总RNA、体液总RNA等。
产品简介
本试剂盒专为miRNA定量检测设计，采用SYBR Green I嵌合荧光法，搭配茎环引物技术，解决miRNA片段短、易非特异扩增的痛点。试剂盒组成完整，包含2×miRNA SYBR Master mix、Tag Primer、ddH₂O，可满足多次实验需求，无需额外搭配基础试剂。
核心优势
特异性强：热启动聚合酶+茎环引物设计双重保障，有效避免引物二聚体和非特异扩增，精准靶向miRNA
灵敏度高：优化后的反应缓冲液提升PCR扩增效率，荧光信号更强，灵敏度优于同类产品，适合低丰度miRNA检测
便捷性好：购买即免费提供上下游引物设计和序列信息，无需自行摸索，大幅提升实验成功率
试剂盒组成
组分 规格（200T） 保存条件
2×miRNA SYBR Master mix 10mL -20℃避光保存
Tag Primer 1mL -20℃避光保存
ddH₂O 10mL -20℃保存
注：所有组分无核酸酶残留，仅用于科研；单次使用量较少时，建议小份分装保存，避免反复冻融
实验步骤
一、miRNA逆转录（需搭配茎环法逆转录试剂盒）
配制逆转录反应体系（10μL体系）：
5×RT Buffer：2μL
RT Enzyme Mix：0.5μL
茎环引物（1μM）：1μL
总RNA样本：1-5μL
RNase-free Water：补至10μL
逆转录反应程序：
16℃ 30分钟
42℃ 30分钟
85℃ 5分钟
4℃ 保存
二、荧光定量PCR检测
配制PCR反应体系（20μL体系）：
2×miRNA SYBR Master mix：10μL
上游引物（10μM）：0.4μL
下游引物（10μM）：0.4μL
cDNA模板：2μL
ddH₂O：7.2μL
PCR扩增程序（3段法）：
95℃ 10分钟（激活聚合酶）
95℃ 10秒 → 60℃ 20秒 → 70℃ 20秒（收集荧光信号），40个循环
溶解曲线分析：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟 → 95℃ 15秒
注意事项
防污染：qPCR灵敏度极高，气溶胶污染会导致假阳性，所有操作需在超净台中进行，使用专用枪头和离心管
模板质量：确保模板无蛋白酶、核酸酶污染，浓度均匀，避免因模板降解或浓度过高/过低导致扩增异常
反应条件：根据引物Tm值、目标片段长度调整退火温度和延伸时间，复杂样本可适当优化循环数
试剂保存：所有试剂需-20℃避光保存，反复冻融会破坏酶活性和荧光物质，建议小份分装使用
操作规范：配制反应体系时轻柔混匀，防止气泡产生；避免强光照射试剂
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关键字： miRNA茎环染料法荧光定量PCR试剂盒;miRNA Stem-loop Dye-;
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