基本信息
产品名称 | RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG) | 货号 | P-PR1264 |
规格 | 1ml、25ml | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：RAPA3G Probe qPCR MasterMix (with UDG)
作用机制：预混了热启动DNA聚合酶、dNTP、缓冲液、UDG酶和荧光探针反应所需的成分，UDG酶可降解含有尿嘧啶的扩增产物，避免交叉污染；利用探针法荧光定量PCR原理，通过检测荧光信号强度实现对靶基因的定量分析，热启动聚合酶提高了反应的特异性。
适用样本：各类核酸样本，如血液、体液、组织、拭子等提取的DNA或cDNA样本，适用于病原体定量检测、基因表达分析等。
产品概述
专为探针法实时定量PCR（qPCR）设计的预混体系，整合了RAPA3G热启动DNA聚合酶、dNTP、含UDG（尿嘧啶DNA糖基化酶）的反应缓冲液、荧光探针检测所需组分等。UDG酶可有效降解携带尿嘧啶的DNA，防止PCR产物的交叉污染，大幅降低假阳性结果。热启动聚合酶保证了反应的高特异性，该产品具备高灵敏度、宽线性范围的特点，能精准定量起始模板浓度，适用于基因表达分析、病原微生物定量检测、拷贝数变异分析等研究。
产品特点
防污染体系：内置UDG酶可彻底降解含尿嘧啶的污染DNA，杜绝假阳性
热启动技术：95℃加热5分钟才恢复活性，完全消除低温非特异性扩增
高灵敏度检测：最低可检测到10拷贝的靶基因，动态范围达8个数量级
多重适配性：兼容TaqMan、Molecular Beacon等多种探针检测模式
操作步骤
样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀
初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀
柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液
洗涤纯化：
向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发
RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物
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注意事项
试剂准备
洗涤液首次使用前必须按说明书比例添加无水乙醇，否则无法有效去除杂质
所有试剂使用前需恢复至室温，避免温度差异影响DNA结合效率
操作细节
上柱前需确保溶液pH＜7，否则DNA无法有效结合至硅胶膜
洗脱液需加至硅胶膜中央，避免直接加至柱壁导致洗脱不完全
若需长期保存DNA，建议使用TE缓冲液洗脱，避免DNA降解
安全防护
操作过程中需佩戴一次性手套和实验服，避免样本污染和皮肤接触试剂
部分试剂含刺激性成分，如不慎接触皮肤或眼睛，需立即用大量清水冲洗
质量控制
纯度检测：纯化后DNA的A260/280比值应在1.7 - 1.9之间，A260/230比值≥2.0
完整性检测：通过琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳检测，DNA条带应清晰无弥散
下游验证：纯化后的DNA可直接用于PCR扩增、酶切、连接、测序等实验，验证其功能完整性
关键字： RAPA3G Probe qPCR Ma;
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