qPCR MasterMix with UDG (Probe)

基本信息‌

‌英文名称‌：qPCR MasterMix with UDG (Probe)
作用机制：包含热启动DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、UDG酶、荧光探针等成分。UDG酶可降解含有dUTP的DNA，有效防止PCR产物的交叉污染；荧光探针与目标序列特异性结合，在PCR扩增过程中，探针被Taq酶的5'-3'外切酶活性切割，释放荧光信号，实现对目标核酸的定量检测。

适用样本：适用于需要高特异性、高灵敏度定量检测的qPCR实验，可用于临床诊断、基因表达分析、病原体检测等，样本包括临床样本、动植物组织、细胞等。
产品概述
专为探针法实时定量PCR设计的预混体系，包含热启动DNA聚合酶、dNTP、含尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG）的反应缓冲液、荧光探针检测所需组分等。UDG酶可特异性降解携带尿嘧啶的DNA，有效防止PCR产物的交叉污染，大幅降低假阳性结果；热启动聚合酶保证了反应的高特异性。该产品具备高灵敏度和宽线性范围，能精准定量起始模板浓度，适用于基因表达分析、病原微生物定量检测、拷贝数变异分析等研究。
产品特点
探针法检测：适配TaqMan、Molecular Beacon等荧光探针，特异性更高

UDG防污染体系：内置UDG酶，降解含尿嘧啶的污染DNA，杜绝假阳性

热启动技术：热启动Taq酶，非特异性扩增低，提高定量准确性

高灵敏度：检测下限低至1拷贝，线性范围宽，重复性好
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）