基本信息
产品名称 | RAPA3G SYBR Green qPCR Mix | 货号 | P-PR1262 |
规格 | 1ml、5ml | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：RAPA3G SYBR Green qPCR Mix
作用机制：包含热启动DNA聚合酶、dNTP、缓冲液和SYBR Green I染料，SYBR Green I染料可与双链DNA结合并发出荧光，在PCR扩增过程中，荧光信号强度与DNA产物量成正比，从而实现定量检测。热启动聚合酶可减少非特异性扩增，提高反应准确性。
适用样本：基因组DNA、cDNA等各类核酸样本，适用于基因表达定量分析、病原体检测等无需多重检测的荧光定量PCR实验。
产品概述
基于SYBR Green荧光染料法的实时定量PCR预混试剂，包含RAPA3G热启动DNA聚合酶、dNTP、反应缓冲液、SYBR Green I荧光染料等核心组分。SYBR Green I能与双链DNA结合发出荧光，通过实时监测荧光信号强度变化实现对DNA扩增过程的定量分析。热启动聚合酶有效抑制非特异性扩增，确保反应特异性，该产品具有高灵敏度、良好的重复性和宽的定量线性范围，可广泛应用于基因表达定量、基因型分析、病原体检测等常规qPCR实验。
产品特点
低背景荧光：优化的SYBR Green I染料配方，有效降低非特异性荧光信号
宽定量范围：可实现10-10^8拷贝数的准确定量，R²值≥0.999
快速扩增模式：配合快速PCR程序，30分钟内可完成40个循环反应
强抑制剂耐受：能抵抗血液中肝素、血红蛋白等常见PCR抑制物干扰
操作步骤
一、实验前准备
向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记
载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存
将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用
二、手工提取流程
样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）
洗涤纯化：
取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）
核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸
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注意事项
实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染
蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用
还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效
若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量
提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存
若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱
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