基本信息
产品名称 | Bst 4.0 SYBR Green Mix | 货号 | P-PR1247 |
规格 | 100Tx20μl | 用途 | 仅供科研 |
英文名称:Bst 4.0 SYBR Green Mix
作用机制:预混了Bst 4.0 DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green荧光染料等成分。在等温扩增过程中,SYBR Green染料结合到新合成的双链DNA上,产生荧光信号,可实时监测扩增过程,实现对目标核酸的定量或定性检测。
适用样本:适用于需要实时监测的等温扩增实验,如病原体的快速定量检测、基因表达分析等,样本包括临床样本、环境样本、动植物组织等。
产品概述
基于Bst 4.0 DNA聚合酶和SYBR Green荧光染料的等温扩增-荧光检测预混试剂,整合了Bst 4.0聚合酶、反应缓冲液、dNTP、SYBR Green I荧光染料等组分。Bst 4.0聚合酶的强链置换活性保证了高效的等温扩增,SYBR Green I可实时监测扩增过程中的荧光信号变化,实现对核酸的定量分析。该产品适用于现场快速检测、病原体定量检测、基因表达分析等等温荧光定量实验。
产品特点
等温荧光定量:集成SYBR Green I染料,实时监测等温扩增过程
预混体系:包含Bst 4.0聚合酶、dNTP、SYBR Green染料等,使用便捷
高灵敏度:可实现对低拷贝核酸的准确定量
操作简便:恒温反应,无需PCR仪,适合现场快速定量检测
操作步骤
一、试剂预处理
取出洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ浓缩液,按试剂瓶标注比例加入无水乙醇,充分混匀后备用
将洗脱液置于65℃水浴锅中预热
二、水样处理与核酸富集
取10mL预处理后的水样(杂质较多的水样需先经0.45μm滤膜过滤)加入50mL洁净烧杯
依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液,充分搅拌混匀
将烧杯置于65℃水浴中孵育15分钟,期间每隔5分钟搅拌一次
三、核酸纯化与洗脱
向烧杯中加入15mL异丙醇,充分搅拌混匀后,将混合液转移至连接富集吸附柱的50mL注射器针筒内
静置2分钟后,开启真空抽滤装置,将液体缓慢抽滤至富集吸附柱内(注意不要抽干)
向针筒内加入5mL洗涤液Ⅰ,静置2分钟后抽滤;再加入5mL洗涤液Ⅱ,静置2分钟后抽滤,重复洗涤液Ⅱ步骤1次
取下富集吸附柱,放入收集管中,12000rpm常温离心3分钟,去除残留洗涤液
将吸附柱转移至新的收集管,加入50-100μL预热的洗脱液,静置2分钟后12000rpm离心2分钟
收集管中的液体即为纯化后的病毒核酸,可直接用于下游实验或-70℃保存
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注意事项
试剂保存:试剂盒应避光保存于2-8℃,有效期12个月;核酸富集因子避免反复冻融,使用后立即放回冰箱
水样预处理:高浊度或杂质过多的水样,需先经0.45μm滤膜过滤,避免堵塞吸附柱
操作规范:实验全程佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品,避免直接接触水样与试剂;若不慎接触皮肤或眼睛,立即用大量清水冲洗
试剂配制:洗涤液需现用现配,按比例加入无水乙醇后充分混匀,未使用的稀释液可在2-8℃保存1个月
核酸保存:提取的核酸若长期保存,需置于-70℃环境,避免反复冻融;短期可在4℃保存24小时
器材要求:所有实验器材需为无RNA酶耗材,实验前可经180℃干烤6小时或用RNA酶清除剂处理
关键字: Bst 4.0 SYBR Green M;
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