PM原代细胞小核酸转染试剂

基本信息‌

‌中文名称‌：PM原代细胞小核酸转染试剂

货号：P-PR1413

规格：0.5ml、1.0ml、1.5ml

‌英文名称‌：PM Primary Cell Small Nucleic Acid Transfection Reagent
作用机制：利用阳离子脂质体或聚合物载体，与小核酸（siRNA、miRNA等）形成复合物，通过细胞膜融合或内吞作用将小核酸递送至原代细胞内，同时降低对原代细胞的毒性。 

适用样本：各类原代细胞，如原代肝细胞、原代神经元、原代免疫细胞等。
产品概述

本试剂可高效转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA，适用于绝大多数原代细胞，甚至对一些活体寄生虫幼虫也能取得理想转染效果。

核心优势：转染阳性率一般在80%以上，肝细胞LaminA/C基因敲除效率可达95%以上；转染细胞死亡率不到10%，大幅降低细胞毒性对实验结果的影响；操作简便，血清对转染效果无影响，无需刻意更换培养液。

材料准备

试剂：PM原代细胞小核酸转染试剂、siRNA（或其他小核酸）、细胞培养基（含血清/不含血清）

耗材：细胞培养板（以24孔板为例）、移液器及枪头、离心管

仪器：CO₂培养箱、超净工作台

操作步骤（以24孔培养板为例）

1. 细胞接种

转染前1天，将原代细胞接种于24孔培养板，每孔加入500μl完全培养基

确保转染时细胞汇合度为30%-50%，避免使用抗生素

37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜

2. 转染复合物制备

试剂稀释：

取0.6-30pmol siRNA（终浓度1-50nM），用50μl无血清培养基稀释，轻轻混匀

取1.0-3.0μl转染试剂，用50μl无血清培养基稀释，轻轻混匀，室温孵育5分钟

复合物组装：将上述两种稀释液混合，轻轻颠倒混匀，室温孵育20分钟

注意：需在25分钟内完成后续加样操作，避免复合物稳定性下降

3. 细胞转染

直接将100μl转染复合物加入含0.5ml完全培养基的细胞孔中

轻轻晃动培养板，确保复合物均匀分布

37℃、5% CO₂培养箱中培养18-72小时，检测基因抑制效果

（可选）培养4-6小时后更换培养基，但非必须操作

优化建议

siRNA用量优化：初次实验建议设置10nM、30nM、50nM、100nM四个浓度梯度，后续根据实验结果调整

转染试剂用量优化：建议设置1.0μl、2.0μl、3.0μl三个梯度，结合细胞状态选择最优用量

孵育时间优化：不同细胞类型和靶基因的最佳检测时间不同，可在18h、24h、48h、72h分别取样检测

注意事项

细胞状态：确保转染时细胞处于对数生长期，活力良好

试剂保存：转染试剂应避光保存于-20℃，避免反复冻融

无菌操作：所有操作需在超净工作台中进行，避免污染

血清影响：本试剂可在含血清培养基中直接转染，无需更换无血清培养基

抗生素使用：转染前后24小时内避免使用抗生素，防止细胞毒性增加

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