ThermoStable V Reverse transcriptase（200U/ul）(无甘油)

基本信息‌

‌英文名称‌：ThermoStable V Reverse Transcriptase (200U/ul, Glycerol-free)
作用机制：一种热稳定型逆转录酶，无甘油配方，可在较高温度下（如50-55℃）进行逆转录反应，能有效逆转录富含二级结构的RNA模板，具备较高的逆转录效率和热稳定性，无甘油配方避免了对某些实验体系的干扰。 

适用样本：总RNA、mRNA、病毒RNA等各类RNA样本，尤其适用于含有复杂二级结构的RNA模板的逆转录反应，如GC含量高的RNA。
产品概述
这是一款无甘油配方的热稳定反转录酶，酶活单位达200U/μl，专为RNA反转录实验设计。无甘油的特殊配方使其在储存和使用过程中，能有效避免甘油对某些后续实验步骤的干扰，适配更多样化的实验体系。凭借出色的热稳定性，它可在较高温度下有效抑制RNA二级结构，提升反转录的效率与全长cDNA的合成比例，适用于各类RNA模板，尤其是富含二级结构的RNA，为RT-PCR、qRT-PCR等实验提供可靠的cDNA模板。
产品特点
热稳定性反转录：可在55℃高温下有效反转录富含二级结构的RNA

无甘油配方：避免甘油对下游qPCR和体外翻译实验的影响

长cDNA合成能力：可合成长达12kb的完整cDNA链

抗抑制剂能力：能抵抗RNA样品中的多糖、多酚等杂质干扰
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。