HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)

基本信息‌

‌英文名称‌：HotStart RAPA3G DNA Polymerase (10U/ul, Glycerol-free)
作用机制：一种热启动DNA聚合酶，通过化学修饰或抗体结合，在低温下无活性，升温至PCR变性温度时恢复活性，可有效减少非特异性扩增；同时具备较高的扩增效率和热稳定性，无甘油配方可避免对某些实验体系的干扰。 

适用样本：各类DNA模板，包括基因组DNA、cDNA、质粒DNA等，适用于常规PCR、高特异性PCR扩增实验。
产品概述
一款不含甘油的热启动型DNA聚合酶，依托RAPA3G技术平台研发，具备热启动活性，在低温条件下酶活性被抑制，需经过高温激活后才发挥聚合功能，能有效降低非特异性扩增，提升PCR反应的特异性与灵敏度。该酶无甘油成分，避免了甘油对某些PCR反应体系或下游实验的干扰，适用于对反应体系成分要求严苛的PCR扩增实验，可应用于基因分型、突变检测、常规DNA片段扩增等研究领域。
产品特点
热启动活性：依托RAPA3G技术平台研发，具备热启动活性，在低温条件下酶活性被抑制，需经过高温激活后才发挥聚合功能，有效降低非特异性扩增

无甘油干扰：不含甘油成分，避免了甘油对某些PCR反应体系或下游实验的干扰

高特异性：大幅提升PCR反应的特异性与灵敏度

适用严苛体系：适用于对反应体系成分要求严苛的PCR扩增实验，可应用于基因分型、突变检测、常规DNA片段扩增等研究领域
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。