基本信息
产品名称 | Lambda核酸外切酶 | 货号 | P-PR1355 |
规格 | 1000U、5KU | 用途 | 仅供科研 |
英文名称:Lambda Exonuclease
作用机制:一种5'-3'核酸外切酶,可从双链DNA的5'末端开始降解DNA链,优先降解带有5'磷酸基团的DNA链,产生单链DNA片段,对单链DNA无作用。
适用样本:双链DNA模板,可用于制备单链DNA、DNA序列分析、重组DNA鉴定等实验,尤其适合处理带有5'磷酸基团的DNA片段。
产品概述
该酶是从大肠杆菌中表达的λ噬菌体核酸外切酶,具有高度的5'→3'外切酶活性,能从双链DNA的5'磷酸化末端开始降解DNA,释放出单核苷酸,而对5'羟基末端的双链DNA几乎无作用。它可用于将双链DNA转化为单链DNA、构建DNA测序模板、去除PCR产物中的引物等实验,在分子克隆、DNA测序和基因分析等领域发挥重要作用。
产品特点
5'磷酸末端特异性:仅从双链DNA的5'磷酸化末端开始降解
单链DNA生成:可将双链DNA高效转化为单链DNA模板
方向特异性:严格按5'→3'方向降解,产物为单核苷酸
测序应用:可用于构建DNA测序模板,提升测序质量
实验前准备
试剂与耗材检查:确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内,外观无浑浊、沉淀;PCR管、枪头需为无酶无菌规格。
仪器预热:提前10-15分钟启动PCR仪,设置好反应程序,确保仪器达到预设温度。
环境准备:在超净工作台内操作,佩戴无粉手套,避免交叉污染;操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。
反应体系配制
冰上操作:将所有试剂放置于冰盒内,避免酶失活。
体系配比(以25μL体系为例):
PCR预混液(含Taq酶、dNTP、Buffer):12.5μL
上游引物(10μM):1μL
下游引物(10μM):1μL
模板DNA:1-5μL(根据模板浓度调整)
无酶水:补足至25μL
轻柔混匀:用移液器轻轻吹吸混合液3-5次,避免产生气泡;若有气泡可短暂离心去除。
分装体系:将配制好的反应液分装至PCR管中,每管25μL,盖紧管盖。
PCR仪上机反应
程序设置:根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序:
预变性:95℃,3-5分钟
循环阶段:95℃变性30秒,55-65℃退火30秒,72℃延伸(根据片段长度调整,1kb约1分钟),循环25-35次
终延伸:72℃,5-10分钟
保温:4℃。
上机运行:将PCR管放入PCR仪样品槽,确保管盖紧密贴合;启动程序,等待反应完成。
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注意事项
无菌操作:所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理,避免外源DNA污染
温度控制:酶、dNTP等试剂需-20℃储存,避免反复冻融
体系优化:根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度
对照设置:每次实验需设置阴性对照(无模板)和阳性对照(已知阳性模板)
关键字: Lambda核酸外切酶;Lambda Exonuclease;
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