基本信息
产品名称 | T5核酸外切酶 | 货号 | P-PR1350 |
规格 | 1000U、10KU | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：T5 Exonuclease
作用机制：一种5'-3'核酸外切酶，可从双链DNA的5'末端开始降解DNA链，同时可降解单链DNA，对RNA无作用，可用于去除DNA片段的5'末端、制备单链DNA等。
适用样本：单链或双链DNA模板，可用于DNA片段末端修饰、DNA序列分析、重组DNA构建等实验。
产品概述
该酶是一种从大肠杆菌中表达的T5噬菌体核酸外切酶，具有强大的5'→3'外切酶活性，能从双链DNA的5'末端开始降解DNA，释放单核苷酸，同时也能降解单链DNA和RNA，但对双链DNA的活性更高。它可用于DNA测序模板的制备、去除PCR产物中的引物、构建DNA缺失突变体等实验，在分子生物学研究中，为DNA的修饰和分析提供了高效的工具。
产品特点
5'→3'外切活性：从双链DNA的5'末端持续降解，释放单核苷酸
底物广谱性：可作用于双链DNA、单链DNA和RNA，对双链DNA活性最高
无序列偏好：对DNA序列无选择性，适用于各种来源的核酸模板
温度特性：最适反应温度37℃，热稳定性一般，65℃快速失活
操作步骤
样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀
初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀
柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液
洗涤纯化：
向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发
RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物
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注意事项
样本处理：
血浆抗凝剂建议使用EDTA或柠檬酸钠，避免使用肝素（会抑制PCR检测）
样本应避免反复冻融，新鲜样本建议尽快处理
试剂使用：
miRNA提取试剂含有胍盐，具有强烈腐蚀性，操作时需佩戴防护眼镜、手套和口罩
自备试剂需确保无RNase污染，避免影响RNA完整性
实验操作：
所有操作需在无RNase环境中进行，使用RNase-Free的枪头和离心管
离心过程需确保离心管盖紧，避免液体渗漏
产物检测：
由于血清/血浆中miRNA含量极低，提取产物浓度通常在5ng/μl以下，难以用常规NanoDrop测量，建议直接取10μl进行下游反转录实验
为获得更可靠数据，推荐使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA定量检测
产物保存：提取的miRNA产物可立即用于下游实验，或分装后置于-80℃长期保存，避免反复冻融
关键字： Tli (exo-) DNA Polym;
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