基本信息
产品名称 | 2×Xerox PCR MasterMix( 含染料） | 货号 | P-PR1114 |
规格 | 1ml×5 | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：2×Xerox PCR MasterMix (with Dye)
作用机制：预混了DNA聚合酶、dNTP、缓冲液和电泳示踪染料，可高效催化DNA扩增反应，示踪染料便于监测电泳进程，无需额外添加上样缓冲液，简化实验操作。
适用样本：各类DNA模板，适用于常规PCR扩增、基因分型、病原体检测等实验，产物可直接用于琼脂糖凝胶电泳检测。
产品概述
这是一款含染料的2×浓度Xerox PCR预混液，集成了PCR反应所需的关键组分，包括Xerox DNA聚合酶、dNTPs、专用缓冲体系以及电泳上样染料。用户仅需加入模板DNA和引物即可开展PCR扩增，反应结束后可直接进行凝胶电泳检测，无需额外处理。该预混液经过优化，能为PCR反应提供稳定高效的扩增环境，适用于多种DNA模板的扩增实验，在保证扩增特异性和效率的同时，简化实验操作步骤。
产品特点
高保真扩增：Xerox DNA聚合酶具有较高的保真度，降低碱基错配率
预混优化体系：优化的缓冲液配方，增强PCR扩增的特异性和效率
电泳一体化：含上样染料，PCR产物直接电泳，简化实验流程
适用范围广：适用于基因分型、突变检测、常规DNA片段扩增等
操作步骤
样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀
初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀
柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液
洗涤纯化：
向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发
RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物
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注意事项
样本处理：
血浆抗凝剂建议使用EDTA或柠檬酸钠，避免使用肝素（会抑制PCR检测）
样本应避免反复冻融，新鲜样本建议尽快处理
试剂使用：
miRNA提取试剂含有胍盐，具有强烈腐蚀性，操作时需佩戴防护眼镜、手套和口罩
自备试剂需确保无RNase污染，避免影响RNA完整性
实验操作：
所有操作需在无RNase环境中进行，使用RNase-Free的枪头和离心管
离心过程需确保离心管盖紧，避免液体渗漏
产物检测：
由于血清/血浆中miRNA含量极低，提取产物浓度通常在5ng/μl以下，难以用常规NanoDrop测量，建议直接取10μl进行下游反转录实验
为获得更可靠数据，推荐使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA定量检测
产物保存：提取的miRNA产物可立即用于下游实验，或分装后置于-80℃长期保存，避免反复冻融
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