基本信息
中文名称：外泌体RNA提取试剂盒
货号：P-PR1450
规格：50T、100T
英文名称：Exosomal RNA Extraction Kit
作用机制：多基于磁珠特异性捕获/优化多聚物沉淀法富集外泌体，再通过裂解液破碎外泌体膜结构，释放内部RNA；结合硅胶膜离心柱/专利树脂特异性吸附RNA，经洗涤去除蛋白质、脂质等杂质，最后用洗脱液获得纯RNA，可完整保留包括miRNA在内的各类RNA分子。
适用样本：血清、血浆、尿液、脑脊液、细胞培养上清等来源的外泌体样本
产品概述
外泌体是细胞分泌的直径30 - 150nm的微小囊泡，广泛存在于血液、唾液、尿液等体液中，携带RNA、蛋白质等生物分子，在细胞间通讯中发挥关键作用。外泌体RNA提取试剂盒可从外泌体中分离出高质量的总RNA（包括miRNA、mRNA、lncRNA和CircRNA等），纯化后的RNA适用于RT - PCR、RT - qPCR、RNA测序、RNA芯片等下游实验。该试剂盒操作简便，无需昂贵的超速离心设备，仅需普通实验室离心机即可完成提取。
产品组成
组分名称 规格（以50次提取为例） 保存条件
裂解缓冲液 8ml 2 - 8℃避光保存
RNA结合离心柱（带收集管） 50套 室温保存
洗涤缓冲液1 20ml 室温保存
洗涤缓冲液2 20ml 室温保存
洗脱缓冲液 5ml 室温保存
无核酸酶1.5ml离心管 50支 室温保存
注：第一次使用前，需在洗涤缓冲液1和洗涤缓冲液2中分别加入32毫升100%乙醇；建议在接收时将洗脱缓冲液分成小等份保存。
产品特点
高效提取：采用优化的裂解和纯化体系，可快速从外泌体中提取高质量总RNA，提取过程可在1 - 2小时内完成。
高纯度高回收率：能有效去除杂质，获得的RNA纯度高、完整性好，回收率稳定，满足下游实验对RNA质量的严格要求。
广泛适用性：适用于多种来源的外泌体，如细胞培养上清、血清、血浆、尿液等。
操作简便：无需复杂的仪器设备，实验流程简单易懂，降低了操作门槛，适合不同实验经验的人员使用。
操作步骤
一、样品预处理（以上清液样本为例）
若为冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中解冻，完全融化后置于冰上；若为新鲜样品，收集后直接置于冰上。
将样品转移至离心管中，4℃下以3000×g离心10分钟，去除细胞碎片。若沉淀较多，可重复离心1 - 2次，取上清液。
将上清液转移至新离心管，4℃下以10000×g离心10分钟，去除杂质碎片，取上清液备用。
二、外泌体裂解与RNA释放
取预处理后的上清液，按照试剂盒说明书加入适量的裂解缓冲液，涡旋振荡充分混匀，室温静置5分钟。
加入等体积的氯仿，剧烈振荡15秒，室温静置3分钟。
4℃下以12000×g离心15分钟，此时溶液分为三层，上层为无色水相，中间层为蛋白层，下层为有机相。小心吸取上层水相转移至新的离心管中，避免吸取中间层。
三、RNA结合与纯化
向水相中加入等体积的无水乙醇，轻轻颠倒混匀。
将混合液转移至RNA结合离心柱中，4℃下以8000×g离心1分钟，弃去收集管中的废液。
向离心柱中加入洗涤缓冲液1，4℃下以8000×g离心1分钟，弃去废液。
向离心柱中加入洗涤缓冲液2，4℃下以12000×g离心2分钟，弃去废液。
将离心柱空管4℃下以12000×g离心2分钟，彻底去除残留的洗涤缓冲液。
四、RNA洗脱
将离心柱转移至新的无核酸酶1.5ml离心管中。
向离心柱膜中央加入适量的洗脱缓冲液，室温静置2分钟。
4℃下以8000×g离心1分钟，收集离心管中的液体，即为纯化的外泌体RNA。
注意事项
实验过程中全程佩戴一次性手套和口罩，避免RNA酶污染。所有实验耗材需确保无RNA酶。
裂解缓冲液和氯仿具有刺激性和毒性，操作时需在通风橱中进行，避免接触皮肤和吸入挥发气体。
吸取上层水相时要小心，避免吸入中间层蛋白，以免影响RNA纯度。
洗脱缓冲液的温度和体积会影响RNA的洗脱效率，建议使用预热至65℃的洗脱缓冲液，并根据需要调整洗脱体积。
纯化后的RNA应尽快进行下游实验，如需保存，可分装后置于 - 80℃冰箱，避免反复冻融。
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