Super ECL Substrate

基本信息‌

‌英文名称‌：Super ECL Substrate
作用机制：化学发光底物，由过氧化物酶底物和增强剂组成。在HRP（辣根过氧化物酶）的催化下，底物发生氧化反应，产生发光信号，通过化学发光成像系统检测信号强度，用于Western blotting实验中检测目标蛋白的表达。

适用样本：适用于Western blotting实验，可检测各种生物样本中的目标蛋白，如细胞裂解液、组织匀浆、血清、血浆等。
产品概述
Super ECL Substrate即超敏化学发光底物，是Western Blot（蛋白免疫印迹）实验中用于检测目的蛋白的核心试剂。它基于辣根过氧化物酶（HRP）催化的化学发光反应原理，当HRP标记的二抗与结合在膜上的一抗-目的蛋白复合物结合后，加入ECL底物，HRP催化底物发生氧化反应并释放光子，通过化学发光成像系统或X射线胶片可捕获发光信号，实现对目的蛋白的定性与半定量分析。Super ECL Substrate具有极高的灵敏度，可检测低至皮克级的蛋白，且发光信号稳定、持续时间长，能有效提升Western Blot实验的检测精度与重复性，适用于各类蛋白样品的检测分析。
产品特点
超高检测灵敏度：可检测低至皮克级（pg）蛋白，比普通ECL底物灵敏度高5-10倍，适合微量样本检测。

发光信号稳定：发光信号持续时间长达24小时，信号强度均匀，无需曝光计时，结果重复性好。

低背景干扰：优化的底物配方有效降低非特异性结合产生的背景，提升信噪比。

兼容常规流程：与HRP标记的二抗完全兼容，适配化学发光成像系统与X射线胶片两种检测方式。
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）