基本信息
产品名称 | Golden 1st cDNA Synthesis Kit(with dsDNase) | 货号 | P-PR1310 |
规格 | 100T | 用途 | 仅供科研 |
英文名称:Golden 1st cDNA Synthesis Kit (with dsDNase)
作用机制:在逆转录反应前,利用dsDNase特异性降解样本中的基因组DNA,避免基因组DNA污染导致的假阳性结果;随后使用高活性逆转录酶合成第一链cDNA,保证cDNA的纯度与完整性。
适用样本:细胞、组织、血液等来源的总RNA样本,尤其适用于基因表达分析、qPCR等对基因组DNA污染敏感的实验。
产品概述
Golden 1st cDNA Synthesis Kit(with dsDNase)是一款带有双链DNA酶(dsDNase)的第一链cDNA合成试剂盒,专为去除样本中的基因组DNA污染、高效合成cDNA设计。试剂盒包含高性能反转录酶、dsDNase、反应缓冲液、dNTPs、引物等组分,其中dsDNase可特异性降解样本中的双链基因组DNA,而不影响RNA模板,有效避免了基因组DNA对后续实验(如qPCR)的干扰。反转录酶具有高活性与高特异性,能高效催化RNA反转录为cDNA,适用于多种RNA模板(如总RNA、mRNA等),可合成长片段cDNA。该试剂盒操作流程简便,先利用dsDNase去除基因组DNA污染,再进行反转录反应,合成的cDNA纯度高、特异性好,可直接用于PCR、qPCR、基因表达分析、基因克隆等实验,为基因表达研究提供了可靠的技术支持。
产品特点
基因组DNA去除:内置dsDNase,特异性降解基因组DNA,不影响RNA模板,有效避免gDNA污染。
高保真性反转录:采用高保真反转录酶,碱基错配率低,适合基因表达定量分析。
广谱模板适配:可反转录总RNA、mRNA、病毒RNA、microRNA等多种RNA模板。
操作简便:先去除gDNA,再进行反转录,单一反应体系完成,无需额外步骤。
实验前准备
试剂与耗材检查:确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内,外观无浑浊、沉淀;PCR管、枪头需为无酶无菌规格。
仪器预热:提前10-15分钟启动PCR仪,设置好反应程序,确保仪器达到预设温度。
环境准备:在超净工作台内操作,佩戴无粉手套,避免交叉污染;操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。
反应体系配制
冰上操作:将所有试剂放置于冰盒内,避免酶失活。
体系配比(以25μL体系为例):
PCR预混液(含Taq酶、dNTP、Buffer):12.5μL
上游引物(10μM):1μL
下游引物(10μM):1μL
模板DNA:1-5μL(根据模板浓度调整)
无酶水:补足至25μL
轻柔混匀:用移液器轻轻吹吸混合液3-5次,避免产生气泡;若有气泡可短暂离心去除。
分装体系:将配制好的反应液分装至PCR管中,每管25μL,盖紧管盖。
PCR仪上机反应
程序设置:根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序:
预变性:95℃,3-5分钟
循环阶段:95℃变性30秒,55-65℃退火30秒,72℃延伸(根据片段长度调整,1kb约1分钟),循环25-35次
终延伸:72℃,5-10分钟
保温:4℃。
上机运行:将PCR管放入PCR仪样品槽,确保管盖紧密贴合;启动程序,等待反应完成。
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注意事项
无菌操作:所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理,避免外源DNA污染
温度控制:酶、dNTP等试剂需-20℃储存,避免反复冻融
体系优化:根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度
对照设置:每次实验需设置阴性对照(无模板)和阳性对照(已知阳性模板)
关键字: Golden 1st cDNA Syn;
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