基本信息
中文名称：细胞DNA提取试剂盒(磁珠法）
货号：P-PR1510
规格：50T、100T
英文名称：Cell DNA Extraction Kit (Magnetic Bead Method)
作用机制：利用细胞裂解液破坏细胞膜，释放细胞核DNA；磁珠表面的官能团在特定盐浓度下特异性结合DNA，通过磁力架分离磁珠与杂质；经洗涤液去除蛋白质、RNA、脂类等污染物，最后用洗脱液将DNA从磁珠上解离，获得高纯度基因组DNA。
适用样本：动物细胞系、培养的哺乳动物细胞、贴壁/悬浮细胞样本
产品概述
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和专属缓冲液系统，可从培养细胞、动物组织样本中分离纯化高质量基因组DNA。整个提取过程安全便捷，无需酚类抽提与复杂离心操作，获得的DNA片段大、纯度高、质量稳定，可直接用于酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交等常规分子生物学实验，同时兼容手工提取与高通量自动化平台批量提取。完成10次样本纯化的动手时间仅需40-50分钟。
试剂盒组成（以50次反应规格为例）
组分名称 规格 作用说明
组织消化液GHA 50mL 裂解样本细胞，释放基因组DNA
缓冲液GHC 20mL 调节体系条件，助力DNA与磁珠结合
去蛋白液PD 20mL 去除样本中的蛋白质杂质
漂洗液PWD 20mL 洗涤磁珠上吸附的盐分、残留杂质
蛋白酶K 500μL 降解样本中的蛋白质，辅助细胞裂解
磁珠悬浮液G 500μL 特异性结合DNA，实现核酸分离
洗脱缓冲液TB 15mL 洗脱磁珠上吸附的纯化DNA
产品特点
提取高效快速：单个样本提取全程仅需45分钟，常温即可完成裂解步骤，大幅缩短实验周期
适配性广泛：既支持手工小样本提取，也可搭配各类自动化核酸提取平台实现高通量批量操作
核酸质量优异：提取的DNA OD260/OD280值稳定在1.8-1.9之间，无PCR抑制剂、RNA、蛋白质污染，20mg动物组织样本可获得8-10μg DNA，3×10^6培养细胞可获得8-12μg DNA
操作安全简便：无需使用酚、氯仿等有毒有机溶剂，实验过程更安全，且对操作人员技术要求较低
实验操作步骤
（一）实验前准备
试剂配制：使用前按照瓶身标注体积，在缓冲液GHC中加入异丙醇，在漂洗液PWD中加入无水乙醇，充分混匀后备用；向蛋白酶K粉末中加入指定用量的储存液使其溶解，分装后置于-20℃保存
样本检查：确认细胞样本无污染、霉变，若无法及时提取，可将细胞沉淀与甘油按比例混合后置于-80℃保存，避免反复冻融
仪器准备：准备磁力架、恒温金属浴/水浴锅、移液器、离心管等实验器具，确保器具无核酸酶污染
（二）样本处理
培养细胞样本
贴壁细胞：吸去细胞培养液，用PBS洗涤细胞2次，加入适量胰酶消化细胞，收集细胞悬液于离心管中，1000rpm离心5分钟，弃上清，收集细胞沉淀
悬浮细胞：直接将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃上清，收集细胞沉淀
向细胞沉淀中加入500μL组织消化液GHA和10μL蛋白酶K，涡旋振荡10秒混匀后，置于65℃环境中孵育15-30分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，待细胞充分裂解后进行后续操作
动物组织样本
取20mg动物组织样本置于研磨管中，加入500μL组织消化液GHA，充分研磨至匀浆状态，转移至离心管中，加入10μL蛋白酶K，涡旋振荡10秒混匀，65℃孵育30分钟（每隔10分钟混匀一次），待组织充分裂解后，12000rpm离心5分钟，取上清液进行后续操作
（三）DNA结合与纯化
向处理后的样本中加入600μL缓冲液GHC，抽打振荡或涡旋混匀
加入10μL磁珠悬浮液G（使用前需充分振荡重悬），抽打振荡混匀12分钟
将离心管放置于磁力架上静置30秒，待磁珠完全吸附后，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）
将离心管从磁力架取下，加入900μL去蛋白液PD，抽打振荡混匀3分钟，再次置于磁力架上吸附磁珠并弃去上清，重复此步骤1次
向吸附柱中加入900μL漂洗液PWD，抽打振荡混匀3分钟，置于磁力架上吸附磁珠后弃去上清，重复此步骤1次
将离心管留在磁力架上，室温开盖静置10-15分钟，彻底挥发残留乙醇
（四）DNA洗脱
将吸附有磁珠的离心管从磁力架取下，加入50-100μL洗脱缓冲液TB，抽打振荡混匀后置于56℃环境孵育10分钟（期间颠倒混匀3次）
将离心管放回磁力架上静置2分钟，待磁珠完全吸附后，小心将上清液转移至新的无菌离心管中，即为纯化后的基因组DNA
提取的DNA可立即用于下游实验，或置于-20℃环境长期保存
注意事项
样本保存：样本应避免反复冻融，若无法及时提取，细胞沉淀可与甘油按比例混合后置于-80℃保存，动物组织样本可置于-80℃保存
试剂使用：若缓冲液出现沉淀，可在室温条件下静置溶解后摇匀使用；蛋白酶K需置于-20℃环境保存，避免反复冻融导致活性降低；磁珠严禁冰冻、离心，使用前需充分涡旋振荡20秒使其重悬
操作规范：实验过程中需佩戴手套、口罩，使用无菌无酶耗材，避免样本交叉污染；磁珠吸附过程中需确保磁珠完全沉淀后再吸弃上清
结果优化：若提取的DNA纯度偏低，可增加漂洗液洗涤次数；若DNA产量不足，可适当增加样本起始量或延长孵育裂解时间
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关键字： 细胞DNA提取试剂盒(磁珠法）;Cell DNA Extraction ;
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