基本信息
中文名称：一步染料法RT-qPCR试剂盒
货号：P-PR1423
规格：100反应、250反应、500反应
英文名称：One-step Dye-based RT-qPCR Kit
作用机制：融合逆转录与PCR扩增体系，逆转录酶先将RNA转化为cDNA，Taq酶随后以cDNA为模板进行扩增；SYBR Green I染料与双链DNA非特异性结合，产生荧光信号，信号强度随扩增产物增加而增强，实现对靶基因的定量检测，操作简便、成本较低。
适用样本：细胞、组织、血液等来源的总RNA样本
产品概述
结合逆转录酶与SYBR Green I染料技术，实现从RNA到cDNA再到PCR扩增的一步法操作。适用于基因表达分析、病毒初筛等场景，操作简便，成本较低，可兼容主流荧光定量PCR仪。
产品组成（以96次反应为例）
组分 规格
2×一步法RT-qPCR混合液 1.2mL×2管
RT酶混合液 50μL×1管
无核酸酶水 1mL×1管
阳性对照品 50μL×1管
产品特点
一步法操作：逆转录与PCR扩增一体化，减少操作步骤与污染风险
高灵敏度：最低可检测到10拷贝/μL的靶标RNA
成本优势：采用SYBR Green染料，相较于探针法成本更低
溶解曲线分析：可通过溶解曲线验证扩增特异性
兼容性广：适配所有主流荧光定量PCR仪，无需特殊设置
操作步骤
试剂准备：将试剂室温融化，瞬时离心后置于冰上
反应体系配制（20μL体系）：
试剂 体积（μL）
2×一步法RT-qPCR混合液 10
RT酶混合液 0.5
RNA模板 2-5
无核酸酶水 补至20
PCR反应设置：
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：95℃ 2分钟
循环扩增（40个循环）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光）
溶解曲线：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟 → 95℃ 15秒
数据分析：通过溶解曲线判断扩增特异性，采用2-ΔΔCt法进行相对定量
注意事项
需设置无模板对照，排除引物二聚体干扰
引物设计需避免二级结构与引物二聚体，建议使用引物设计软件优化
反应体系配制需在冰上进行，避免酶活性丧失
溶解曲线出现多个峰时，需优化引物或反应条件
试剂需-20℃避光保存，有效期12个月
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