基本信息
产品名称 | 一步法miRNA反转录试剂盒 | 货号 | P-PR1321 |
规格 | 25T、100TX20μl | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：One-Step miRNA Reverse Transcription Kit
作用机制：将miRNA逆转录为cDNA的过程整合到一个反应体系中，无需单独的步骤；试剂盒含优化的反应缓冲液、逆转录酶与引物，可实现miRNA的高效逆转录，适用于后续的PCR扩增与检测。
适用样本：细胞、组织、血液、血清、血浆等样本中的miRNA逆转录，适用于基因表达分析、疾病诊断等实验。
产品概述
一步法miRNA反转录试剂盒是将miRNA的提取与反转录反应整合到一个步骤中的试剂盒，简化了实验操作流程，提高了实验效率。该试剂盒通常包含裂解液、反转录酶、特异性反转录引物、反应缓冲液、dNTPs、RNase抑制剂等组分，无需单独进行miRNA提取步骤，直接将样本与反应混合物混合，在合适的温度条件下孵育即可完成miRNA的释放与反转录反应。一步法miRNA反转录试剂盒采用了特异性的反转录引物，可选择性地靶向miRNA，实现miRNA的高效反转录，同时抑制其他RNA（如mRNA、rRNA）的反转录，提高了反转录的特异性。它适用于多种样本类型（如细胞、组织、血清、血浆等）中miRNA的反转录，反转录得到的cDNA可直接用于PCR、qPCR、miRNA测序等实验，为miRNA的快速检测与研究提供了便捷的工具。
产品特点
操作超简便：将miRNA提取和反转录反应整合为一步，无需单独提取miRNA，实验步骤减少50%。
节省样本：仅需少量样本即可完成反应，适合珍贵样本分析。
反转录效率高：采用高效反转录酶和特异性引物，miRNA反转录效率比常规方法高2-3倍。
产物质量好：反转录得到的cDNA纯度高，可直接用于qPCR、测序等下游实验。
兼容性广：适合细胞、组织、血清、血浆等多种样本类型的miRNA检测。
操作步骤
一、试剂预处理
取出洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ浓缩液，按试剂瓶标注比例加入无水乙醇，充分混匀后备用
将洗脱液置于65℃水浴锅中预热
二、水样处理与核酸富集
取10mL预处理后的水样（杂质较多的水样需先经0.45μm滤膜过滤）加入50mL洁净烧杯
依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分搅拌混匀
将烧杯置于65℃水浴中孵育15分钟，期间每隔5分钟搅拌一次
三、核酸纯化与洗脱
向烧杯中加入15mL异丙醇，充分搅拌混匀后，将混合液转移至连接富集吸附柱的50mL注射器针筒内
静置2分钟后，开启真空抽滤装置，将液体缓慢抽滤至富集吸附柱内（注意不要抽干）
向针筒内加入5mL洗涤液Ⅰ，静置2分钟后抽滤；再加入5mL洗涤液Ⅱ，静置2分钟后抽滤，重复洗涤液Ⅱ步骤1次
取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常温离心3分钟，去除残留洗涤液
将吸附柱转移至新的收集管，加入50-100μL预热的洗脱液，静置2分钟后12000rpm离心2分钟
收集管中的液体即为纯化后的病毒核酸，可直接用于下游实验或-70℃保存
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注意事项
试剂保存：试剂盒应避光保存于2-8℃，有效期12个月；核酸富集因子避免反复冻融，使用后立即放回冰箱
水样预处理：高浊度或杂质过多的水样，需先经0.45μm滤膜过滤，避免堵塞吸附柱
操作规范：实验全程佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品，避免直接接触水样与试剂；若不慎接触皮肤或眼睛，立即用大量清水冲洗
试剂配制：洗涤液需现用现配，按比例加入无水乙醇后充分混匀，未使用的稀释液可在2-8℃保存1个月
核酸保存：提取的核酸若长期保存，需置于-70℃环境，避免反复冻融；短期可在4℃保存24小时
器材要求：所有实验器材需为无RNA酶耗材，实验前可经180℃干烤6小时或用RNA酶清除剂处理
关键字： 一步法miRNA反转录试剂盒;One-Step miRNA Rever;
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