基本信息
中文名称：中大量DNA载体提取试剂盒
货号：P-PR1503
规格：20T、40T
英文名称：Medium-to-large Scale DNA Vector Extraction Kit
作用机制：基于碱裂解法大规模裂解细菌，释放质粒/人工染色体等DNA载体；通过沉淀法去除宿主基因组DNA与蛋白质，结合亲和层析或磁珠技术纯化DNA载体，适配中大量样本处理，可获得毫克级高纯度、超螺旋结构完整的DNA载体。
适用样本：大肠杆菌培养的大体积质粒菌液、人工染色体载体菌液
产品概述
本试剂盒专门用于从培养体系中高效提取中大量DNA载体，采用经典的碱裂解法结合硅胶柱纯化技术，可有效去除蛋白质、RNA、内毒素等杂质，获得的DNA载体纯度高、完整性好，超螺旋比例高，能直接用于细胞转染、体外转录、基因克隆、测序等下游分子生物学实验。
产品组成
组分名称 规格（20次装） 功能说明
溶液P1 150mL 悬浮菌体，抑制核酸酶活性
溶液P2 120mL 裂解菌体，释放质粒DNA
溶液PⅢ 130mL 中和裂解液，沉淀蛋白质
结合液 200mL 调节体系，促进DNA结合硅胶柱
洗涤液Ⅰ 300mL 去除大部分蛋白质和RNA杂质
洗涤液Ⅱ 300mL 去除盐离子和残留小分子杂质
洗脱液 100mL 从硅胶柱上解离纯化的DNA载体
RNase A 2mL 降解体系中的RNA杂质
硅胶纯化柱 20个 特异性吸附DNA
50mL收集管 20个 收集纯化过程中的流出液
产品特点
高回收率：从150-250mL大肠杆菌培养液中，可提取0.4-1mg纯净的高拷贝DNA载体，提取率达80%-90%
低内毒素：内毒素含量低于0.1EU/μg DNA，满足细胞转染、动物实验等高要求下游实验
操作安全：无需使用酚、氯仿等有毒试剂，实验过程更安全环保
适用广泛：适用于各种拷贝数的质粒、粘粒、BAC/PAC等大型DNA载体提取
操作步骤
菌体收集：取150-250mL对数生长期的菌液，5000g离心10分钟，弃尽上清
菌体悬浮：加入10mL溶液P1，彻底悬浮菌体沉淀，确保无结块
菌体裂解：缓慢加入10mL溶液P2，温和颠倒离心管4-6次，室温静置5分钟，至溶液变清亮
中和沉淀：缓慢加入10mL溶液PⅢ，温和颠倒离心管6-8次，室温静置10分钟，此时出现白色絮状沉淀
杂质去除：12000g离心10分钟，将上清液小心转移至新离心管，避免吸入沉淀
DNA结合：加入0.7倍体积的结合液，充分混匀，将混合液分批加入硅胶纯化柱，8000g离心2分钟，弃流出液
洗涤纯化：加入10mL洗涤液Ⅰ，8000g离心2分钟，弃流出液；加入10mL洗涤液Ⅱ，8000g离心2分钟，弃流出液，重复洗涤一次
干燥柱体：将纯化柱置于新的50mL收集管中，12000g离心5分钟，彻底去除残留的洗涤液
DNA洗脱：向纯化柱中加入5-10mL预热至65℃的洗脱液，室温静置5分钟，12000g离心5分钟，收集管中即为纯化的DNA载体
注意事项
提取的DNA载体量与细菌培养浓度、质粒拷贝数相关，低拷贝或大型载体需加大菌体用量，并按比例增加试剂用量
裂解和中和步骤操作要轻柔，避免剧烈震荡导致DNA载体断裂
若提取的DNA载体用于细胞转染，所有耗材需确保无RNA酶和内毒素污染
未使用的试剂需密封保存于2-8℃，RNase A需分装后-20℃保存，避免反复冻融
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关键字： 中大量DNA载体提取试剂盒;Medium-to-large Scal;
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